基底硬度變化對(duì)肝細(xì)胞骨架構(gòu)象及細(xì)胞連結(jié)方式的影響.pdf

1、肝纖維病變的主要特征是胞外基質(zhì)蛋白大量堆積，組織進(jìn)行性硬化，其中環(huán)境物理硬度的變化對(duì)肝內(nèi)細(xì)胞的生物學(xué)行為有著巨大的影響。基底硬度通過(guò)影響細(xì)胞粘附調(diào)整細(xì)胞預(yù)應(yīng)力，進(jìn)而影響細(xì)胞形態(tài)、骨架裝配、黏著斑形成、細(xì)胞間連接方式等多種行為，這些行為對(duì)細(xì)胞表型的維持是至關(guān)重要的。本研究通過(guò)建立硬度可控的體外培養(yǎng)模型，探索基底硬度和細(xì)胞外基質(zhì)密度對(duì)肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞生物學(xué)行為的影響，討論了基質(zhì)硬度變化在纖維化病變進(jìn)程中的作用。
　　 目的：通過(guò)制備硬度可

2、控聚丙烯酰胺培養(yǎng)基底模擬不同硬度的體外培養(yǎng)環(huán)境，研究肝細(xì)胞對(duì)不同硬度和胞外基質(zhì)密度的響應(yīng)，從而揭示肝纖維化病變過(guò)程中基質(zhì)變硬對(duì)肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞的影響。
　　 方法：采用形態(tài)學(xué)觀察，免疫熒光染色等手段，研究個(gè)體細(xì)胞和融合細(xì)胞在不同硬度、胞外基質(zhì)密度的聚丙烯酰胺培養(yǎng)基底上細(xì)胞形態(tài)學(xué)、骨架裝配方式、E-鈣粘素表達(dá)、黏著斑蛋白-樁蛋白表達(dá)的差別；并通過(guò)圖像分析軟件對(duì)上述結(jié)果進(jìn)行定量分析，揭示細(xì)胞生物學(xué)行為變化與基底硬度的相關(guān)性。
　　

3、 結(jié)果：生長(zhǎng)在不同硬度基底上細(xì)胞長(zhǎng)短徑比、球形指數(shù)差異顯著(p＜0.05)，細(xì)胞極化程度隨基底硬度的增加而增加，較軟質(zhì)基底(3.6kPa)上細(xì)胞肌動(dòng)蛋白微絲裝配成沿細(xì)胞周邊分布的環(huán)狀結(jié)構(gòu)，細(xì)胞間形成邊-邊接觸的切向連接。而在硬度較高基底上，細(xì)胞肌動(dòng)蛋白微絲裝配成沿細(xì)胞長(zhǎng)軸排布的應(yīng)力纖維，細(xì)胞間形成輻射狀細(xì)胞連接；免疫熒光染色顯示，細(xì)胞中E-鈣粘素的平均熒光強(qiáng)度隨基底的變硬而減少，而樁蛋白平均熒光強(qiáng)度的則相反；融合細(xì)胞在軟質(zhì)基底上細(xì)胞有形