膽囊癌、慢性結(jié)石性膽囊炎及膽囊腺瘤的膽囊膽汁蛋白質(zhì)組學(xué)研究.pdf

1、目的：建立人膽囊癌、慢性結(jié)石性膽囊炎及膽囊腺瘤的膽囊膽汁蛋白質(zhì)表達(dá)譜，通過定量蛋白質(zhì)組學(xué)、差異蛋白質(zhì)組學(xué)等方法研究膽囊癌與后兩種膽囊良性疾病差異表達(dá)的蛋白質(zhì)。
　　 方法：分別收集無污染的膽囊癌、慢性結(jié)石性膽囊炎及膽囊腺瘤患者的膽囊膽汁，經(jīng)去鹽去脂酶解后，二維色譜分離肽段，串聯(lián)質(zhì)譜分析肽段，最后檢索人蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫建立膽汁蛋白質(zhì)表達(dá)譜并同時(shí)行蛋白質(zhì)定量、功能及差異分析。另外收集膽囊癌、慢性結(jié)石性膽囊炎及膽囊腺瘤患者的膽囊組織石蠟標(biāo)

2、本，通過免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)膽囊良惡性組織中差異蛋白的表達(dá)水平。
　　 結(jié)果：⑴膽囊癌、慢性結(jié)石性膽囊炎及膽囊腺瘤患者的膽囊膽汁中共計(jì)鑒定出544種、495種和221種不同的蛋白質(zhì)，其中各有43種、28種和16種蛋白質(zhì)匹配兩條或以上的獨(dú)立肽段（多樣肽段匹配蛋白）。⑵膽囊癌、慢性結(jié)石性膽囊炎及膽囊腺瘤患者的膽囊膽汁中差異表達(dá)的多樣肽段匹配蛋白分別有30種、11種和7種。⑶對(duì)照已報(bào)道的正常膽囊、膽石癥、膽管上皮癌和胰腺癌的膽汁蛋白質(zhì)

3、譜，在膽囊癌、慢性結(jié)石性膽囊炎及膽囊腺瘤患者的膽囊膽汁中分別新鑒定出27種、21種和9種多樣肽段匹配蛋白。⑷S100A8蛋白在膽囊癌膽囊膽汁的三次重復(fù)實(shí)驗(yàn)中分別匹配5條、2條和4條肽段，在慢性結(jié)石性膽囊炎組作為單肽段匹配蛋白測(cè)到兩次，而在膽囊腺瘤組三次重復(fù)實(shí)驗(yàn)中未匹配任何肽段；另外，膽囊癌膽汁的S100A8蛋白質(zhì)定量指標(biāo)蛋白豐度冪均值為6.01, 遠(yuǎn)高于慢性結(jié)石性膽囊炎（0.49）和膽囊腺瘤（0.00）（多樣本秩和檢驗(yàn)，p＜0.05）。

4、⑸S100A8蛋白表達(dá)于膽囊癌及慢性結(jié)石性膽囊炎組織中，前者的S100A8表達(dá)水平高于后者。膽囊癌中S100A8陽性細(xì)胞包括腫瘤浸潤(rùn)的中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞等免疫細(xì)胞及癌細(xì)胞，以前者為著。S100A8陽性細(xì)胞數(shù)在42份膽囊癌、21份慢性結(jié)石性膽囊炎及20份膽囊腺瘤組織標(biāo)本200×顯微鏡下中位數(shù)分別為62.5、8和5，膽囊癌的S100A8陽性細(xì)胞數(shù)多于后兩者且有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（多樣本秩和檢驗(yàn)，p＜0.01），但S100A8表達(dá)與膽囊癌患者的

5、年齡、性別及腫瘤分化、分期和病理類型無明顯相關(guān)（卡方檢驗(yàn)，p＞0.05）。
　　 結(jié)論：①運(yùn)用大規(guī)模二維色譜/串聯(lián)質(zhì)譜的蛋白質(zhì)組學(xué)分析方法成功建立了人膽囊癌、慢性結(jié)石性膽囊炎及膽囊腺瘤的膽囊膽汁蛋白質(zhì)表達(dá)譜。②膽囊良惡性疾病差異蛋白質(zhì)的確立為深入研究膽囊癌變的分子機(jī)制、分子標(biāo)志物及分子靶向治療等奠定了基礎(chǔ)。③膽汁的差異蛋白質(zhì)組學(xué)和定量蛋白質(zhì)組學(xué)研究表明，膽囊癌患者S100A8蛋白表達(dá)水平高于慢性結(jié)石性膽囊炎及膽囊腺瘤。④膽囊癌組

6、織中浸潤(rùn)了大量中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞等炎性免疫細(xì)胞，這符合了炎癥相關(guān)性腫瘤的特性。⑤S100A8蛋白表達(dá)于膽囊癌及慢性結(jié)石性膽囊炎組織中，前者的S100A8表達(dá)水平高于后者。膽囊癌中S100A8陽性細(xì)胞包括腫瘤浸潤(rùn)的中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞等免疫細(xì)胞及癌細(xì)胞，以前者為著，提示S100A8在膽囊癌這一炎癥相關(guān)性癌癥的發(fā)生過程中起重要作用。 S100A8和NF-kappa B在膽囊癌的表達(dá)水平一致較慢性膽囊炎高，S100A8可能通過NF-kapp