氨基胍改善甲基乙二醛誘導(dǎo)的SK-N-SH細胞中tau蛋白過度磷酸化.pdf

1、研究背景：在許多有活性的羰基化合物和糖化終末產(chǎn)物（AGEs）的前體中，甲基乙二醛（MG）可能對細胞內(nèi)的AGEs的形成起著關(guān)鍵作用。以前的研究已經(jīng)報道AGEs與阿爾茨海默?。ˋD）的發(fā)病機制有關(guān)，即與由異常磷酸化的tau 聚合而成的神經(jīng)原纖維纏結(jié)（NFTs）的形成有關(guān)。研究報道AD 患者體內(nèi)的MG 水平是正常人體內(nèi)的兩倍，而其在腦脊液的濃度是血漿中的五到七倍。MG的特異清除酶——乙二醛酶I（Glyoxalase I）的表達在AD的早期階段

2、有減少，而在AD的中末期有增加。另外有研究證明乙二醛酶I在tau的轉(zhuǎn)基因小鼠P301L中有明顯的升高，這表明MG與tau 之間有聯(lián)系。而細胞內(nèi)的AGEs與PHF-tau 共定位，AGEs和糖化的tau 蛋白培養(yǎng)可以誘導(dǎo)氧化應(yīng)激并最終導(dǎo)致神經(jīng)功能障礙和細胞死亡，暗示了AGEs和tau 之間有某種內(nèi)在聯(lián)系。我們推測，MG 作為AGEs 重要的高活性的前體，可能是AD的tau 病理性改變重要的上游致病因素之一。因此，探明其在tau 蛋白異常磷

3、酸化中的機制，對進一步理解AD和尋找新的防治途徑具有重要意義。
　　 目的：探討MG 對tau 蛋白磷酸化的影響及其作用機制。
　　 方法：用不同濃度的MG 處理SK-N-SH細胞不同時間，觀察在不影響細胞活性的MG濃度和處理時間的條件下，通過western blotting和免疫熒光等方法檢測經(jīng)MG 處理后的細胞，tau 蛋白磷酸化變化模式，并探討tau 磷酸化相關(guān)的蛋白激酶和磷酸酶活性及其在tau 磷酸化中的作用；使

4、用相關(guān)激酶的抑制劑和氨基胍闡明MG 影響tau 蛋白異常磷酸化的可能機制。
　　 結(jié)果：
　　 1.用不同濃度的MG 處理SK-N-SH細胞1 小時，或者用1.0 mM 濃度的MG 處理細胞不同時間，發(fā)現(xiàn)用少于5mM的MG 處理細胞1 小時或者用1 mM的MG 處理細胞時間低于4 小時對細胞的活性無明顯影響。
　　 2.用不同濃度的MG分別處理細胞1 小時，或者用1.0 mM 濃度的MG 處理細胞不同小時，可以觀

5、察到MG 能夠誘導(dǎo)tau在許多不同位點磷酸化。
　　 3.GSK-3β和p38在MG 誘導(dǎo)的tau 異常磷酸化中激活。
　　 4.JNK，Erk1/2，cdk5在MG 誘導(dǎo)的tau 異常磷酸化中不起作用。
　　 5.PP2A的活性在MG 誘導(dǎo)的tau 異常磷酸化中未改變。
　　 6.使用GSK-3β和p38的抑制劑能夠減弱MG 誘導(dǎo)的tau的異常磷酸化。
　　 7.使用氨基胍（AG）處理細胞，能夠