虎杖抗耐甲氧西林金黃色葡萄球菌活性物質(zhì)的分離及生物學(xué)活性研究.pdf

1、背景：
　　抗生素的發(fā)現(xiàn)與使用使人類(lèi)在治療感染性疾病病人時(shí)擁有了強(qiáng)大武器。然而，抗生素的過(guò)度使用甚至濫用導(dǎo)致院內(nèi)和院外的抗生素耐藥菌日益增多。其中，耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(Methicillin-resistant Stphylococcus aureus，MRSA)具有高致病率、高死亡率的特點(diǎn)，治療非常棘手。因此，研究新的治療MRSA藥物已經(jīng)迫在眉睫。
　　目前，研發(fā)抗MRSA的藥物的主要策略有以下兩種：一是直接抗菌策略

2、。包括研究新的抗菌藥物和對(duì)現(xiàn)有抗菌藥物進(jìn)行結(jié)構(gòu)修飾，如利奈唑胺、達(dá)托霉素等。二是間接抗菌策略。研究能夠增強(qiáng)已有抗菌藥物的作用的藥物，這類(lèi)藥物可以自身沒(méi)有抗菌作用，但是能夠增強(qiáng)細(xì)菌對(duì)已經(jīng)耐藥的抗生素的敏感性，即抗菌增敏劑。
　　我們課題組長(zhǎng)期開(kāi)展從傳統(tǒng)的中藥中分離提取具有抗菌活性物質(zhì)的工作。因此，在前期工作基礎(chǔ)上，本研究首先以PBP2a為靶點(diǎn)從37種傳統(tǒng)的中草藥和虎杖葉中篩選出與PBP2a具有高結(jié)合力的中草藥；其次以體外抗MRSA活

3、性為導(dǎo)向，從與PBP2a具有高結(jié)合力的中草藥中篩選出具有最佳抗MRSA活性的中藥虎杖根；然后以虎杖根為研究對(duì)象，進(jìn)行具有抗MRSA活性物質(zhì)的分離及其體外生物學(xué)活性研究。
　　目的：
　　篩選具有抗MRSA活性的中草藥，并發(fā)現(xiàn)其活性物質(zhì)基礎(chǔ)，為新的抗MRSA藥物的研究奠定基礎(chǔ)。
　　方法：
　　1.以PBP2a為靶點(diǎn)，采用生物傳感器技術(shù)進(jìn)行37種傳統(tǒng)中草藥中具有與PBP2a高結(jié)合力的中草藥的篩選；
　　2.采

4、用MIC、抑菌環(huán)、細(xì)菌生長(zhǎng)曲線(xiàn)等實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)行虎杖根醇提物的乙醚萃取部分(ET-RPC)和其單體化合物體外抗MRSA活性評(píng)價(jià)；
　　3.采用高效液相色譜-質(zhì)譜（HPLC-MS）聯(lián)用技術(shù)和制備高效液相色譜技術(shù)對(duì)ET-RPC中單體化合物進(jìn)行分離、鑒定；
　　4.采用生物傳感器技術(shù)對(duì)獲得的抗MRSA活性單體化合物進(jìn)行結(jié)合PBP2a親和力的測(cè)定。
　　5.采用透射電鏡觀察大黃素對(duì)MRSA252細(xì)胞壁形態(tài)學(xué)的影響
　　結(jié)果：

5、
　　1.以PBP2a為靶點(diǎn)，從37種中草藥和虎杖葉中篩選出具有與PBP2a較高結(jié)合力的8種中藥：白頭翁、虎杖根、大血藤、地骨皮、桂皮、大黃、赤芍、梔子和虎杖葉；
　　2.對(duì)8種中草藥和虎杖葉體外抗MRSA活性評(píng)價(jià)結(jié)果顯示，虎杖根、地骨皮水提物的抗MRSA作用較強(qiáng)，而虎杖根水提物的抗MRSA作用較地骨皮水提物更強(qiáng)；
　　3.虎杖根醇提物的乙醚萃取部(ET-RPC)對(duì)MRSA具有一定的體外直接抗MRSA活性；
　　

6、4.ET-RPC中的7種單體化合物分別是虎杖苷、白藜蘆醇-4-O-D-(6'-沒(méi)食子?；?-吡喃葡萄糖苷、白藜蘆醇、決明松-8-O-葡萄糖苷、大黃素-8-O-葡萄糖苷、6-羥基大黃素、大黃素；
　　5.大黃素具有較強(qiáng)的體外直接抗MRSA活性，是ET-RPC中的主要抗MRSA物質(zhì)；
　　6.大黃素對(duì)MRSA252標(biāo)準(zhǔn)株和臨床分離株均具有較強(qiáng)的抗菌活性，其與PBP2a的親和力（KD值）為6.78×10-5M。
　　7.大黃

7、素可影響MRSA252細(xì)胞壁的完整性。
　　結(jié)論：
　　虎杖根醇提物的乙醚萃取部位（ET-RPC）具有良好的體外抗MRSA標(biāo)準(zhǔn)菌株252和17株臨床分離株的活性；通過(guò)LC-MS和制備液相色譜技術(shù)從ET-RPC中得到7種主要單體化合物分別為：白藜蘆醇-4-O-D-(6'-沒(méi)食子?；?-吡喃葡萄糖苷，白藜蘆醇，決明松-8-O-葡萄糖，大黃素-8-O葡萄糖苷，6-羥基大黃素，大黃素。其中，僅大黃素具有抗菌活性，說(shuō)明大黃素是虎杖根E