獨(dú)活寄生湯對豚鼠膝骨關(guān)節(jié)炎早期干預(yù)的研究.pdf

1、1.研究背景:
　　 骨關(guān)節(jié)炎(Osteoarthritis,OA),是最常見的一種慢性、進(jìn)展性關(guān)節(jié)疾病。其病理特點(diǎn)為關(guān)節(jié)軟骨變性、破壞、軟骨下骨硬化,關(guān)節(jié)邊緣和軟骨下骨反應(yīng)性增生、骨贅形成。該病好發(fā)在負(fù)重較大的膝關(guān)節(jié)、髖關(guān)節(jié)、脊柱及手指關(guān)節(jié)等部位。臨床上以關(guān)節(jié)疼痛、腫脹畸形、僵硬、功能障礙為主要表現(xiàn)。OA發(fā)病率隨年齡的增長而增加,特別是當(dāng)今世界進(jìn)入老齡化,該病的發(fā)生率呈逐年上升趨勢。
　　 由于OA的病因和發(fā)病機(jī)制是一

2、個非常復(fù)雜的過程,到目前為止尚未完全闡明。因此如何對OA進(jìn)行早期診斷和治療成為醫(yī)學(xué)界的一大難題。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究認(rèn)為關(guān)節(jié)軟骨的損傷是OA的始動因素和中心環(huán)節(jié),也是治療的關(guān)鍵。而關(guān)節(jié)軟骨的損傷則是以軟骨中的蛋白多糖的降解和流失為首發(fā)事件。OA早期的病理學(xué)特征是軟骨細(xì)胞周圍的基質(zhì)缺損,這是細(xì)胞周圍的蛋白水解酶和膠原水解酶作用的結(jié)果。隨著病情的進(jìn)展會出現(xiàn)更多的軟骨基質(zhì)缺損,同時出現(xiàn)軟骨纖維化、軟骨面出現(xiàn)裂隙和軟骨面的缺損。OA早期關(guān)節(jié)軟骨中的蛋白

3、多糖在機(jī)械應(yīng)力、各種酶類的降解及一系列細(xì)胞因子等的共同作用下發(fā)生改變。蛋白多糖的變化包擴(kuò)兩個方面,一方面是它在關(guān)節(jié)軟骨中的含量減少,另一方面是它的組成和分布也發(fā)生明顯的變化。因此,對OA的特異性治療應(yīng)是針對于關(guān)節(jié)軟骨的病理改變,修復(fù)軟骨基質(zhì)的缺損和恢復(fù)軟骨細(xì)胞的功能。目前治療OA的常用藥物有非甾體抗炎藥(NSADs)、改善癥狀的慢作用藥(SYSADOA)和關(guān)節(jié)腔注射劑三大類。
　　 OA屬中醫(yī)“痹癥”范疇。中醫(yī)學(xué)認(rèn)為,機(jī)體關(guān)節(jié)的

4、活動,筋脈的舒通,都以脾氣健運(yùn),肝腎盛實,氣血充盈,經(jīng)絡(luò)暢達(dá)為基礎(chǔ)。因為腎主骨生髓,肝藏血柔筋活絡(luò),脾主肌肉與四肢。所以肢體關(guān)節(jié)、筋脈、腰膝之病皆與脾、肝、腎密切相關(guān)。如果肝腎不足,氣血虛弱,則會使風(fēng)寒濕邪乘虛而入,形成風(fēng)寒濕痹證?！饵S帝內(nèi)經(jīng)·痹論篇》日:“風(fēng)寒濕三氣雜至,合而為痹也,…。”痹者,閉也,就是閉阻不通之意。人體肝腎精血不足,筋脈失養(yǎng),寒濕之邪侵入人體,流注關(guān)節(jié),使氣血痹阻。因此,其基本病機(jī)為肝腎虧虛、氣血不足為本,風(fēng)寒濕熱

5、、痰瘀互結(jié)為標(biāo),中藥多以補(bǔ)益肝腎、益氣養(yǎng)血、祛風(fēng)散寒除濕、化痰逐瘀通絡(luò)為主。
　　 獨(dú)活寄生湯為唐代醫(yī)家孫思邈創(chuàng)制,載于其著《備急千金要方》一書中,是治療風(fēng)寒濕痹證的重要方劑之一。本方具有祛風(fēng)散寒、蠲痹止痛、補(bǔ)益氣血、滋養(yǎng)肝腎、舒通筋絡(luò)的功效。方中以熟地、牛膝、杜仲、寄生補(bǔ)肝益腎,壯骨強(qiáng)筋。當(dāng)歸、芍藥川芎和營養(yǎng)血,所謂治風(fēng)先治血,血行風(fēng)自滅。人參、茯苓、甘草益氣扶脾,又所謂祛邪先補(bǔ)正,正旺則邪自除也。獨(dú)活、細(xì)辛入腎經(jīng),能搜伏風(fēng),

6、使之外出,桂心能入肝腎血分而祛寒,秦、防風(fēng)為風(fēng)藥卒徒,周行肌表,且又風(fēng)能勝濕?，F(xiàn)代研究表明該方具有明顯的抗炎、鎮(zhèn)痛、消腫作用,并且具有調(diào)節(jié)機(jī)體免疫平衡,抑制非特異性炎癥的作用。本實驗采用不同的方法對其早期干預(yù)的效果進(jìn)行檢測,從不同角度驗證中藥在預(yù)防和治療OA方面的作用。
　　 2.研究目的
　　 本實驗通過采用豚鼠自發(fā)性O(shè)A的模型,動態(tài)觀察不同時間點(diǎn)各組豚鼠早期OA脛骨平臺軟骨的形態(tài)學(xué)變化及血中蛋白多糖含量的變化,探討?yīng)?/p>

7、活寄生湯對豚鼠早期OA的干預(yù)作用。
　　 3.研究方法
　　 選用雌性1月齡Hartley豚鼠104只,隨機(jī)分為正常組、模型組、中藥組(獨(dú)活寄生湯)、西藥組(鹽酸氨基葡萄糖)4組。其中正常組8只,其余3組每組32只,分1.5月、2月、2.5月、3月4個時間亞組,每組8只。各組動物分別于達(dá)到分組月齡后處死取脛骨平臺軟骨進(jìn)行HE及阿利辛藍(lán)染色,觀察軟骨的形態(tài)學(xué)變化、檢測各組標(biāo)本血清中蛋白多糖含量的變化、并采用顯微紅外檢測軟骨

8、中蛋白多糖的結(jié)構(gòu)及含量的變化。
　　 4.結(jié)果
　　 HE染色結(jié)果顯示模型組2月齡時開始出現(xiàn)軟骨的輕度損傷,阿利辛藍(lán)染色結(jié)果顯示2月齡時軟骨中蛋白多糖的含量開始下降,到3月齡時豚鼠的脛骨關(guān)節(jié)面軟骨均有不同程度的破壞、軟骨中的蛋白多糖含量下降。中藥組和西藥組軟骨破壞程度較輕,尤以中藥組改變輕微。血清蛋白多糖Elisa檢測結(jié)果顯示模型組血清蛋白多糖含量自1.5月開始下降,而且隨年齡的增長而逐漸降低,且不同月齡組間差異顯著。中

9、藥組和西藥組血清蛋白多糖下降程較模型組輕,尤以中藥組血清蛋白多糖含量下降程度最輕。顯微紅外檢測結(jié)果顯示,模型組自1.5月齡時豚鼠的脛骨關(guān)節(jié)面軟骨蛋白多糖結(jié)構(gòu)和含量就已有改變,到3月時與其它兩治療組比較改變明顯,但中藥組和西藥組較模型組改變輕微,尤以中藥組改變最輕。
　　 5.結(jié)論
　　 OA早期關(guān)節(jié)軟骨的破壞過程中,蛋白多糖的降解是重要的因為,經(jīng)不同方法檢測顯示中藥獨(dú)活寄生湯可以抑制關(guān)節(jié)軟骨中蛋白多糖的降解從而防止或延緩