二氮嗪后處理對大鼠心肌線粒體蛋白質(zhì)表達(dá)譜的影響.pdf

1、目的:
　　 建立大鼠心肌缺血再灌注損傷模型，觀察二氮嗪后處理對大鼠心肌缺血再灌注損傷心臟功能的影響。利用蛋白質(zhì)組學(xué)研究技術(shù)，觀察二氮嗪后處理對大鼠心肌線粒體蛋白質(zhì)表達(dá)譜的變化，為尋找新的藥物后處理作用靶點(diǎn)和潛在的臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。
　　 方法:
　　 1.建立Langendorff大鼠離體心臟缺血再灌注損傷模型。18只成年雄性SD大鼠隨機(jī)分為正常組(Nor)、缺血再灌注損傷組(Con)和二氮嗪后處理組(DZ

2、)，每組6只。
　　 灌注方案:
　　 Nor組:持續(xù)灌注Kerbs-Henseleit緩沖液（K-H液）120 min，無缺血再灌注損傷。Con組和DZ組:缺血前先灌注K-H液平衡20 min，灌注4℃ St.Thomas停跳液，使全心缺血40 min后，按以下方案灌注:①Con組:灌注K-H液60 min;②DZ組:灌注K-H液前給予50μmol/L二氮嗪2 min，繼之K-H液58 min。觀察各組平衡末及灌注末心

3、率(HR)、左室發(fā)展壓(LVDP)、左室舒張末壓(LVDEP)、以及最大dp/dt等心功能的變化。
　　 2.差速離心和Nycodenz密度梯度離心分離純化大鼠心肌線粒體，透射電鏡驗(yàn)證其純度。
　　 3.提取線粒體蛋白質(zhì)，采用雙向電泳技術(shù)(2-DE)對蛋白質(zhì)進(jìn)行分離，利用PDQuest8.0軟件分析各組蛋白質(zhì)表達(dá)的差異。選取差異在2倍以上的蛋白質(zhì)點(diǎn)，采用MALDI-TOF-MS鑒定。
　　 4.Western b

4、lot法回復(fù)驗(yàn)證部分差異蛋白質(zhì)的表達(dá)變化，證實(shí)雙向電泳結(jié)果的可靠性。
　　 結(jié)果:
　　 1.平衡末各組間心功能無明顯差異，續(xù)灌末Nor組和DZ組心功能明顯優(yōu)于Con組(P＜0.05);
　　 2.Western blothe和透射電鏡證實(shí)了Nycodenz密度梯度離心法提取的線粒體純較高;
　　 3.對各組線粒體蛋白進(jìn)行2-DE，每張膠上檢測出513±27個(gè)蛋白質(zhì)斑點(diǎn);PDQuest8.0軟件分析后得到

5、21個(gè)差異蛋白質(zhì)，經(jīng)MALDI-TOF-MS分析，成功鑒定出6個(gè)蛋白;
　　 4.DZ組與Con組比較發(fā)現(xiàn):NADH脫氫酶黃素蛋白1(NDUFV1)、2-酮戊二酸脫氫酶(OGDH)、NADH脫氫酶鐵硫蛋白1(NDUFS1)表達(dá)升高。有兩個(gè)蛋白質(zhì)點(diǎn)被鑒定為ATP合酶a亞基，其中一個(gè)蛋白點(diǎn)表達(dá)升高(SSP7704)，而另一個(gè)蛋白點(diǎn)表達(dá)降低(SSP2017)。
　　 結(jié)論:
　　 1.二氮嗪后處理能夠減輕心肌缺血/再灌

6、注損傷，有保護(hù)心肌、改善心功能的作用。
　　 2.①二氮嗪后處理能通過上調(diào)NDUFV1和NDUFS1的表達(dá)，維系線粒體呼吸鏈的穩(wěn)定，促進(jìn)能量合成，保障心臟的能量供應(yīng)。
　　 ②二氮嗪處理通過上調(diào)OGDH的表達(dá)，促進(jìn)丙酮酸的氧化脫羧，為乙酰CoA進(jìn)入三羧酸循環(huán)做準(zhǔn)備，保障有氧代謝的正常進(jìn)行。
　　 3.缺血再灌注損傷會(huì)造成ATP合酶a亞基的降解，而二氮嗪開放線粒體敏感性鉀通道以后能在一定程度上緩解這種現(xiàn)象的發(fā)生。<