Urocortin后處理對缺血大鼠心肌線粒體凋亡通路的影響.pdf

1、目的:研究Urocortin（UCN）后處理對缺血再灌注大鼠心肌線粒體凋亡通路的影響。 方法:將24只Wistar大鼠隨機(jī)分為3組，每組8只，即對照組（CON組）、缺血/再灌注（I/R組）及Urocortin后處理組（UCN組）。CON組：大鼠麻醉后，直接開胸取左心室肌作缺血前對照。I/R組：建立離體心臟Langendorff-Neely模型，灌注K-H緩沖液30 min后，于主動脈根部灌注4℃的St.Thomas-2心臟停搏液

2、，使心臟停跳并低溫下維持30min，復(fù)灌K-H緩沖液60min后，取左心室肌備檢。UCN組：處理同I/R組，僅于復(fù)灌時(shí)復(fù)灌UCN濃度為10-8 mol/L的K-H緩沖液60min，取左心室肌備檢。用蛋白免疫印跡（Western blot）法檢測各組心肌細(xì)胞線粒體凋亡通路的標(biāo)志性蛋白細(xì)胞色素C（CytoC）從線粒體的釋放。用免疫組化染色法（IH）檢測各組心肌細(xì)胞中Bcl-2和Caspase-3蛋白的表達(dá)。用原位末端轉(zhuǎn)移酶標(biāo)記法（TUNEL

3、）檢測各組心肌細(xì)胞的凋亡。 結(jié)果:Western blot檢測顯示，CON組、I/R組和UCN組胞漿中CytoC的相對蛋白含量分別為56.7±2.63％、129.4±2.79％和88.1±2.25％。與缺血前比較，I/R組和UCN組胞漿中CytoC的含量均明顯增高（P<0.05）；再灌注后UCN組胞漿中CytoC的量低于I/R組（P<0.05）。提示缺血再灌注后，有CytoC自心肌細(xì)胞線粒體釋放；經(jīng)UCN后處理后，可明顯抑制Cy

4、toC的釋放。 免疫組化染色顯示，CON組、I/R組和UCN組Caspase-3蛋白的表達(dá)量分別為0.15±0.05、0.36±0.07和0.24±0.06，I/R組和UCN組高于CON組（P<0.05），UCN組低于I/R組（P<0.05）。提示缺血再灌注后，心肌組織Caspase-3蛋白的表達(dá)較缺血前明顯增加；經(jīng)UCN后處理后，明顯抑制了Caspase-3蛋白的表達(dá)。 免疫組化染色結(jié)果顯示，CON組、I/R組和UCN

5、組Bcl-2蛋白的表達(dá)量分別為0.077±0.05、0.12±0.06和0.20±0.05，I/R組和UCN組高于CON組（P<0.05），UCN組高于I/R組（P<0.05）。提示缺血再灌注后，心肌組織Bcl-2蛋白的表達(dá)較缺血前明顯增加；經(jīng)UCN后處理后，心肌組織Bcl-2蛋白的表達(dá)較I/R組明顯增加。 與缺血前比較，缺血再灌注后心肌凋亡細(xì)胞數(shù)明顯增多，心肌細(xì)胞凋亡指數(shù)I/R組（12.81±0.62％）和UCN組（6.77±

6、1.12％）均高于CON組（2.29±0.67％，P<0.05）；再灌注后UCN組低于I/R組（P<0.05）。提示與缺血前相比，再灌注后心肌細(xì)胞凋亡明顯增多；UCN后處理明顯抑制了心肌細(xì)胞凋亡。 胞漿中CytoC含量與Caspase-3蛋白表達(dá)呈正相關(guān)（r=0.796，P<0.05）；胞漿中CytoC含量與心肌細(xì)胞凋亡指數(shù)呈正相關(guān)（r=0.956，P<0.05）。 結(jié)論: UCN后處理能夠抑制線粒體凋亡通路。其機(jī)制可能