硫化氫后處理對缺血心肌影響的研究.pdf

1、目的：采用成年大鼠心肌細胞缺氧復氧模型以及Langendorff離體灌注大鼠心肌缺血再灌注損傷模型，研究硫化氫(以NaHS為供體)后處理對缺血再灌注損傷大鼠心功能與結構的影響，以探索其心肌保護作用的可能機制.
　　 方法：
　　 1.采用Langendorff裝置建立大鼠離體心肌缺血再灌注損傷模型，將SD大鼠隨機分為正常組(NOR)、缺血組(I/R)、缺血后處理組(Pcon)、硫化氫后處理組(NaHS1μM、10μM、1

2、00μM)、5.羥葵酸拮抗組(5HD)、HMR1098拮抗組(HMR1098)，每組8例。正常組：平衡灌注20分鐘后續(xù)灌100min；缺血組：平衡灌注20分鐘，灌注4℃ ST.Thomas停跳液，全心缺血40min，復灌60min；缺血后處理組：離體心臟平衡灌注20分鐘，全心缺血40分鐘，再灌注開始給予6次間隔有氧灌注10秒全心缺血10秒，續(xù)灌60分鐘；硫化氫后處理組：離體心臟平衡灌注20分鐘，全心缺血40分鐘，再灌注60分鐘，再灌注前

3、給予含各濃度NaHS的K-H液2分鐘；5-羥葵酸拮抗組：用藥前給予含5-羥葵酸的K-H液5min，余同NaHS10μM；HMR1098拮抗組：用藥前給予含HMR1098的K-H液5min，余同NaHs10μM.對比觀察(1)平衡末、再灌注15分鐘、30分鐘、45分鐘以及灌注末各時點的心功能指標：心率(HR)、左室舒張末壓(LNEDP)、左室發(fā)展壓(NDP)、壓力瞬時最大變化率(dp/dtmax)；(2)平衡末、再灌注末取心肌組織并分離、

4、提取線粒體，氧電極分析各組心肌組織線粒體呼吸功能的交化。
　　 2.采用Langendorff裝置分離成年大鼠心肌細胞，將同批細胞隨機分為正常組(NOR)、缺氧組(H/R)、硫化氫后處理組(NaHS10μM)、缺氧后處理組(IPTC)、5HD拮抗組(5HD)、HMR1098拮抗組(HMR1098)。各組細胞復氧末在激光共聚焦顯微鏡下對比觀察(1)線粒體膜電位的變化；(2)F-肌動蛋白的變化。
　　 結果：
　　

5、1.心功能指標的變化：A.平衡末，心功能各項指標各組差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；B.與平衡末比較，再灌注后各組心功能均呈下降趨勢，以I/R組以及5HD組下降較為顯著(P<0.05)，而該兩組間無明顯差異；C.再灌注后NaHS1μM、NaHS10μM、NaHS100μM組與Pcon組比較，各組間心功能指標無明顯差異(P>0.05)；D.應用阻斷劑的兩組，以HMR1098組心功能各項指標恢復較為迅速，與NaHS10μM比較，其差異無統(tǒng)

6、計學意義(P>0.05)，但明顯優(yōu)于5HD組和I/R組(P<0.05).
　　 2.心肌組織線粒體呼吸功能的變化：各組平衡末呼吸控制率無顯著性差異(P>0.05)；硫化氫后處理組、缺血后處理組及HMR1098拮抗組再灌注末的呼吸控制率各組間無明顯差異，但明顯高于缺血組以及5HD拮抗組(P<0.05)，5HD拮抗組的RCR與缺血組比較，其差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。
　　 3.心肌細胞線粒體膜電位：與正常組膜電位相比

7、，復氧末H/R組、5HD組膜電位均顯著下降(P<0.05)；NaHS10μM、HMR1098組與IPTC組三組組間膜電位差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，但HMR1098與5HD組比較，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
　　 4心肌動蛋白的變化：心肌細胞缺氧復氧后組間比較，正常組F-肌動蛋白的熒光強度明顯弱于其余各組(P<0.05)；硫化氫后處理組以及缺氧后處理組熒光強度明顯高于缺氧組(P<0.05)；硫化氫后處理組與缺氧后處

8、理組之間差異無統(tǒng)計學意義(P>O.05)。
　　 結論：
　　 1.三種濃度的硫化氫后處理均可模擬缺血后處理對離體灌注心臟的心功能產(chǎn)生一定的保護作用，且各濃度之間無量效關系；
　　 2.硫化氫后處理的作用位點可能是線粒體ATP敏感性鉀通道，與肌膜鉀通道無關；
　　 3.硫化氫后處理對缺血心肌保護作用的機制可能與穩(wěn)定心肌細胞線粒體膜電位進而抑制凋亡，以及促進F-肌動蛋白聚集有關，同時也有助于線粒體呼吸功能的