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文檔簡介
1、目的:在體外循環(huán)中如何有效地進行心肌保護,防止或減輕心肌缺血再灌注損傷發(fā)生,仍然是心血管外科領(lǐng)域中一個極為重要而現(xiàn)實的問題。盡管體外循環(huán)時采用各種心肌保護措施,仍不能完全防止心肌缺血再灌注損傷。以往對體外循環(huán)中心肌保護的研究大多集中在心臟停搏期間如何減輕缺血,缺氧引起的損傷,而且也多局限于對心肌停搏液溫度,成分的改變或給藥方法,途徑的改進等方面。近年來一些學者提出了內(nèi)源性心肌保護的概念:缺血預處理及缺血后處理,為心肌缺血再灌注損傷的預防
2、開拓了一個新的研究領(lǐng)域。本課題擬在犬體外循環(huán)模型上,研究缺血后處理對體外循環(huán)術(shù)后心肌細胞凋亡的影響,探討再灌注損傷補救激酶(RISK)信號傳導系統(tǒng)中Akt,ERK在心肌細胞凋亡過程調(diào)控機制中的作用,研究Bax/Bcl-2基因蛋白表達的差異,并比較缺血預處理與缺血后處理兩者作用機制及效果的異同。本課題分兩部分:第一部分:體外循環(huán)模型的建立及體外循環(huán)對心肌細胞凋亡的影響;第二部分:缺血后處理對心肌細胞凋亡及RISK系統(tǒng),Bcl-2/Bax基
3、因表達的影響 方法:6只試驗犬模擬人體外循環(huán)心臟直視手術(shù)的方法,采取不同的阻斷時間以建立穩(wěn)定的試驗犬體外循環(huán)模型,通過免疫組化及Western-blot法檢測RISK系統(tǒng)中Akt,ERK的變化,通過TUNEL法檢測術(shù)前,阻斷循環(huán)中及開放循環(huán)再灌注后心肌細胞凋亡指數(shù)的變化。在建立穩(wěn)定的試驗犬體外循環(huán)模型基礎(chǔ)上,20只試驗犬隨機分為對照組,缺血預處理組、缺血后處理組及缺血預處理+后處理組。(1)對照組:主動脈阻斷60min,再灌注9
4、0min。(2)缺血預處理組:阻斷主動脈之前,給予2min阻斷/3min再灌注2個循環(huán)。(3)缺血后處理組:開放主動脈之前,給予開放30s/再阻斷30s三個循環(huán)。(4)缺血預處理+后處理組:在阻斷循環(huán)前后給予(2)、(3)組的處理。分別在開始體外循環(huán)之前,阻斷循環(huán)過程中及開放循環(huán)再灌注90min時留取心肌標本,采用免疫組化及Western-blot法檢測犬心肌細胞中Akt,ERK,Bcl-2及Bax蛋白的表達。采用TUNEL法檢測心肌細
5、胞的凋亡指數(shù)。 結(jié)果:采用阻斷循環(huán)60min,再灌注90min可建立穩(wěn)定的試驗犬體外循環(huán)模型,并能滿足試驗要求。與術(shù)前相比,開放循環(huán)再灌注后試驗犬心肌細胞內(nèi)P-Akt,P-ERK蛋白明顯增多(p<0.05)。開放循環(huán)再灌注后心肌細胞凋亡指數(shù)較阻斷循環(huán)前,阻斷循環(huán)中明顯增多。與對照組相比,缺血預處理組、缺血后處理組及缺血預處理+后處理組體外循環(huán)后犬心肌細胞內(nèi)P-Akt,P-ERK,Bcl-2蛋白表達升高,Bax下降(p<0.05)
6、。心肌細胞凋亡指數(shù)降低(p<0.05)。但三組之間比較無統(tǒng)計學意義。 結(jié)論:1.體外循環(huán)可引起心肌細胞凋亡發(fā)生,而其引起的RISK激酶上調(diào)尚不足以完全抑制心肌細胞缺血再灌注損傷導致的心肌細胞凋亡發(fā)生。2.缺血后處理作為一種內(nèi)源性心肌保護性因素,其心肌保護作用可能與RISK通路有關(guān),從而影響凋亡相關(guān)基因Bcl-2/Bax的表達,減少體外循環(huán)中再灌注心肌細胞凋亡,起到心肌保護作用。3.缺血后處理與缺血預處理具有相同的抗心肌細胞凋亡作
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