半夏的組織培養(yǎng)和人工種子研究及其指紋圖譜初探.pdf

1、為了有效解決半夏種苗快速繁殖和對不同產(chǎn)地來源的半夏進(jìn)行有效鑒別，本實(shí)驗(yàn)以傳統(tǒng)中藥材—天南星科植物半夏Pinellia ternate (Thunb.) Breit為材料，對半夏的組織培養(yǎng)技術(shù)、人工種子的制作流程及人工胚乳、播種條件、貯藏條件等進(jìn)行了研究，同時對不同產(chǎn)地半夏的指紋圖譜的建立進(jìn)行了研究。主要結(jié)果如下： 1．通過半夏葉的不同部位誘導(dǎo)愈傷組織獲得半夏無菌試管苗，建立起了半夏組織培養(yǎng)快速繁殖體系。結(jié)果表明：半夏葉柄基部在M

2、S+2,4-D 0.2 mg/L+ KT 1.0 mg/L的培養(yǎng)基上誘導(dǎo)出的愈傷組織效果最好；愈傷組織在MS+2,4-D 0.5 mg/L + KT 1.0 mg/L+ABA 0.5 mg/L+AC 0.4 g/L培養(yǎng)基上繼代培養(yǎng)可提高愈傷組織的增殖率，并降低褐變率。 2．通過在愈傷組織的誘導(dǎo)和分化過程中分別加入不同濃度的多效唑和B9的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，多效唑是半夏壯苗培養(yǎng)有效的外源調(diào)節(jié)物質(zhì)。通過對不同多效唑濃度下培養(yǎng)苗生物學(xué)性狀的

3、比較，結(jié)果顯示，低濃度的多效唑有利于組培苗的矮化和壯苗，高濃度的多效唑抑制半夏組織培苗的正常生長。其最佳矮化和壯苗培養(yǎng)基為MS+2,4-D 0.5 mg/L + KT 1.0 mg/L+多效唑0.6 mg/L。在所選B9的濃度中對半夏愈傷組織的誘導(dǎo)和分化影響不大，各個濃度B9的分化率與對照基本都無顯著差異。 3．進(jìn)行了半夏人工種子制作流程、人工種皮、人工胚乳、播種條件、貯藏條件等方面的研究。結(jié)果表明：從半夏愈傷組織表面切取2-3

4、 mm小塊莖，包埋在3％海藻酸鈉里，滴入2％ CaCl2中反應(yīng)15-20 min，用1/2MS培養(yǎng)液配制人工胚乳，直接播種在鋪有浸潤濾紙的培養(yǎng)皿中萌發(fā)，萌發(fā)率可達(dá)76％。在人工胚乳中添加多菌靈，有助于提高半夏人工種子在有菌條件下的萌發(fā)率。4℃下貯存的人工種子30d內(nèi)發(fā)芽率可達(dá)45.7％。 4．通過收集不同產(chǎn)地的半夏藥材樣品及其常見替用品和偽品，建立了半夏藥材的高效液相色譜指紋圖譜的研究方法。確定了指紋圖譜的測定條件，色譜柱：Ag

5、ilent ZORBAX SB-C18 (5 μm,4.6×250 mm)；流動相：A 95％甲醇，B 純水；線性梯度洗脫：0.01-5 min 100％ B，5-10 min 100％-98％ B，10-30 min 98％-90％ B，30-70 min 90％-0％ B；流速：1.0 mg/L；檢測波長：254 nm；柱溫：30℃；進(jìn)樣量：20 μl。通過分析指紋圖譜，確定了21個峰為半夏藥材指紋圖譜的共有峰，構(gòu)成該藥材特有的色