人工蛹蟲草質量標準及指紋圖譜研究.pdf

1、蛹蟲草，又名北冬蟲夏草，其功效類似于野生的冬蟲夏草，具有補肺益腎、止血化痰、抗疲勞耐缺氧、調節(jié)免疫、輔助抗腫瘤等作用。由于其對自然生長環(huán)境要求不高，人工培育較為成功，有望成為冬蟲夏草的替代品而造福于人類。目前市場上有較多人工培育的蛹蟲草，但無統(tǒng)一規(guī)范的質量控制方法，中國藥典中也沒有關于蛹蟲草質量控制的標準。為了確保人工蛹蟲草合理有效的應用，使其質量評價有具體的量化指標，本文以大米為培養(yǎng)基的蛹蟲草子實體為研究對象，系統(tǒng)地建立了藥材的質量標

2、準，并采用了包括指紋圖譜在內的質量控制手段，為人工蛹蟲草的質量控制研究提供了可以借鑒的思路和方法，為以后藥材的質量評價提供了相應的依據(jù)。 本論文按照2005 版《中國藥典》中相關規(guī)定，系統(tǒng)地研究了人工蛹蟲草質量控制的各項指標，包括性狀、鑒別、檢查及含量測定等項。運用正交試驗設計篩選腺苷和蟲草素的最佳提取條件，確定制備方法為：20％甲醇30倍，超聲提取10min；采用高效液相色譜法同時對腺苷和蟲草素進行含量測定，腺苷在23.2ng

3、～464ng的范圍內線性關系良好(r=0.9999)，平均加樣回收率為98.92％(RSD=1.17％)，蟲草素在30ng～600ng的范圍內線性關系良好(r=0.9999)，平均加樣回收率為99.37％(RSD=1.42％)。結果表明該提取和測定方法操作簡單，重復性好，結果準確可靠，為評價藥材質量提供了依據(jù)。 按照《中藥注射劑指紋圖譜研究的技術要求(暫行)》中相關規(guī)定，采用HPLC/DAD法制定人工蛹蟲草藥材的指紋圖譜。通過分

4、析方法的建立，確定采用Agilent TC–18(5μm，4.6×250mm)色譜柱，甲醇–0.02mol/L KH2PO4 溶液梯度洗脫，分析時間60min，檢測波長260nm，進樣量10μL，流速1.0mL/min，柱溫30℃的色譜指紋圖譜條件，經(jīng)方法學考察證明該方法準確可靠。對12批人工蛹蟲草樣品進行指紋圖譜分析，標定了15個共有峰，并對其中的尿苷、腺苷、蟲草素色譜峰進行了指認。 采用《中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)》計算

5、指紋圖譜相似度，結果12 批蛹蟲草與對照指紋圖譜的相似度均在0.90 以上，表明各批次人工蛹蟲草之間具有較好的一致性。對15批不同產(chǎn)地的人工蛹蟲草進行HPLC指紋圖譜分析，將所得特征數(shù)據(jù)利用系統(tǒng)聚類分析方法進行分類，分析結果將15批藥材分為2 類，其中I類為推薦品，II類為非推薦品。在此基礎上采用逐步判別分析法，建立典則判別函數(shù)和Bayes 判別函數(shù)，選擇交互驗證法對判別函數(shù)的效果進行驗證，結果表明判別相符率達100％。兩類判別函數(shù)的建