藍紅膠囊質(zhì)量標準及藍刺頭指紋圖譜研究.pdf

1、目的：補充完善藍紅膠囊質(zhì)量標準，對藍紅膠囊進行全面的質(zhì)量控制和評價。對藍刺頭藥材進行質(zhì)量控制方法及指紋圖譜研究，以確定藍紅膠囊所用的藍刺頭的品種、產(chǎn)地和來源。對藍刺頭藥材進行初步毒理和抗炎作用研究，為藍刺頭的臨床應用和開發(fā)奠定基礎。
　　方法：以硅膠為固定相，三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸（4:1:1:0.5）為展開劑，采用直接檢視和三氯化鋁試液顯色法，對藍紅膠囊中紅花和藍刺頭藥材進行定性鑒別；以硅膠為固定相，三氯甲烷-甲醇-水（

2、3:1:0.1）和正丁醇-乙酸乙酯-水（4:1:5）上層溶液為展開劑，采用10％硫酸乙醇溶液為顯色劑，分別對藍紅膠囊中的杜仲和三七藥材進行定性鑒別；對藍紅膠囊中珍珠進行理化鑒別。采用單因素考察優(yōu)選藍紅膠囊中藍刺頭、紅花、三七供試品制備方法。采用高效液相色譜法，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，分別以乙腈-醋酸銨緩沖鹽水溶液（21:79）和（9:91）為流動相，柱溫分別為25℃和30℃，流速1ml/min，檢測波長分別為340nm和403n

3、m，對藍紅膠囊中芹菜素-7-O-葡萄糖苷和羥基紅花黃色素A進行含量測定；采用高效液相色譜法，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，分別以甲醇-水、乙腈-水為流動相梯度洗脫，柱溫分別為30℃和25℃，流速1ml/min，采用277nm波長下紫外檢測和蒸發(fā)光散射檢測方法，測定藍紅膠囊中松脂醇二葡萄糖苷和三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Re、人參皂苷Rb1、人參皂苷Rd的含量。采用藍紅膠囊中藍刺頭成分含量測定方法，測定藍刺頭藥材中芹菜素-7-

4、O-葡萄糖苷的含量。以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈-醋酸銨緩沖鹽溶液為流動相梯度洗脫，柱溫30℃，流速1ml/min，檢測波長為340nm，采用高效液相色譜法建立藍刺頭藥材的指紋圖譜。使用D101型大孔樹脂對藍刺頭提取物進行分離純化。采用最大給藥量法對藍刺頭純化物進行急性毒性反應的考察；選用二甲苯致小鼠耳廓腫脹試驗，考察藍刺頭純化物抗炎作用。結(jié)果：藍紅膠囊中藍刺頭、紅花、杜仲、三七藥材的薄層色譜中，斑點清晰，陰性對照無干擾；采用理

5、化方法能有效地對藍紅膠囊中珍珠進行定性鑒別。優(yōu)選確定了藍紅膠囊中藍刺頭、紅花、三七的供試品制備方法。建立的高效液相色譜法可以快速測定藍紅膠囊中指標成分的含量，方法學考察中，芹菜素-7-O-葡萄糖苷、羥基紅花黃色素A、三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、Re、Rb1和Rd在標曲范圍內(nèi)線性關(guān)系均良好，相關(guān)系數(shù)r均大于0.9993，方法的精密度、重復性、耐受性、穩(wěn)定性均良好。不同批次藍紅膠囊供試品中芹菜素-7-O-葡萄糖苷、羥基紅花黃色素A的含量分

6、別在0.038%~0.050%、0.35%~0.91%之間，三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Re、人參皂苷Rb1、人參皂苷Rd的含量分別在0.25%~0.51%、1.13%~2.02%、0.13%~0.24%、0.87%~1.59%、0.19%~0.49%之間。以外標一點法測得不同批次藍紅膠囊供試品中松脂醇二葡萄糖苷的含量在0.023%~0.083%之間，含量限度在0.10mg~0.34mg之間。藍刺頭供試品中芹菜素-7-O-葡萄

7、糖苷的含量在0.005%~0.081%之間，含量波動較大。建立的藍刺頭藥材的指紋圖譜中，采用相對保留時間（參照最高峰S峰）標定了12個共有峰：1（0.423）；2（0.535）；3（0.639）；4（0.858）；5（S，1.000）；6（1.042）；7（1.072）；8（1.307）；9（1.751）；10（1.790）；11（1.891）；12（1.932），其中1、3、8、11號共有峰分別為綠原酸、咖啡酸、芹菜素-7-O-葡萄糖

8、苷和芹菜素。使用D101型大孔樹脂將藍刺頭提取物分離為D101水+30%乙醇浸膏組、D10150%乙醇浸膏組、D10170%+95%乙醇浸膏組三個部分。藍刺頭純化物急性毒性反應試驗中，給藥后連續(xù)觀察14天內(nèi)，無動物死亡，臟器未發(fā)現(xiàn)明顯病變，測得D101水+30%乙醇浸膏組、D10150%乙醇浸膏組、D10170%+95%乙醇浸膏組的最大給藥量分別相當于臨床日用量的854、415、383倍?？寡自囼灲Y(jié)果表明，阿司匹林組和D101-30%中

9、、高劑量組，D101-50%中、高劑量組，D101-70%+95%中、高劑量組均能抑制二甲苯所致的小鼠耳腫脹程度。比較組間差異發(fā)現(xiàn) D101-50%高劑量組和D101-70%+95%高劑量組對急性炎性腫脹抑制作用與阿司匹林相當，D101-30%部分抗炎作用相對較小。
　　結(jié)論：建立的藍紅膠囊和藍刺頭定性和定量方法簡便、快速、專屬性強、重復性好、無干擾，可很好地控制藍刺頭藥材及其制劑的質(zhì)量，有利于提高藍紅膠囊臨床用藥的安全性和有效性