胃癌前期病變監(jiān)測關(guān)鍵技術(shù)研究及熱休克蛋白表達(dá)意義探討.pdf

1、在全球范圍惡性月中瘤中,胃癌病死率排列第二,我國是胃癌的高發(fā)區(qū).胃癌的病因至今不明,但絕大多數(shù)的學(xué)者認(rèn)為胃癌的發(fā)生與遺傳、幽門螺桿菌感染及胃癌前期病變等因素相關(guān).根據(jù)Lauren分類,非賁門區(qū)的胃癌從組織學(xué)上可分為腸型胃癌和彌漫型胃癌.腸型胃癌由胃癌前期病變發(fā)展而來.胃癌前期病變中最多見且關(guān)系最密切的就是慢性萎縮性胃炎.Correa P提出的假說即"從正常胃黏膜到淺表性胃炎到萎縮性胃炎到腸上皮化生到異型增生直至腸型胃癌"已被越來越多的人

2、所接受. §Ⅰ胃癌癌前期病變監(jiān)測的關(guān)鍵技術(shù)--定標(biāo)活檢鉗的發(fā)明和成功研制 一、定標(biāo)活檢鉗的醫(yī)學(xué)要求,定標(biāo)活檢鉗的研制,定標(biāo)液的研制 本研究部分從胃癌前期病變監(jiān)測的醫(yī)學(xué)要求出發(fā),提出醫(yī)學(xué)對定標(biāo)活檢鉗和定標(biāo)液的要求并研制定標(biāo)活檢鉗.定標(biāo)活檢鉗在醫(yī)學(xué)上要求應(yīng)能通過內(nèi)鏡活檢孔道,并具備常規(guī)活檢鉗的功能,還應(yīng)有注射定標(biāo)液的功能.定標(biāo)液必須安全無毒且能長期存在.自行設(shè)計、研制,重復(fù)三批次產(chǎn)品改進(jìn),終于研制出體腔黏膜定標(biāo)活檢鉗

3、.該定標(biāo)活檢鉗結(jié)構(gòu)上有鉗頭,鉗身和手柄三大部分組成,完全符合醫(yī)學(xué)要求,達(dá)到國家技術(shù)標(biāo)準(zhǔn).按定標(biāo)液的醫(yī)學(xué)要求并參考國內(nèi)外醫(yī)學(xué)文獻(xiàn),對各種定標(biāo)液進(jìn)行篩選,最后選用印度墨汁,并就其使用濃度和劑量進(jìn)行探索.從定標(biāo)活檢鉗的研制,定標(biāo)液的篩選到動物試驗和臨床試驗,整個過程歷時五年半.成功地解決了胃癌前期病變監(jiān)測的關(guān)鍵技術(shù)問題. 二、動物試驗 試驗?zāi)康?為檢驗定標(biāo)活檢鉗及定標(biāo)液的性能是否符合醫(yī)學(xué)要求. 試驗內(nèi)容:1、定標(biāo)活檢鉗

4、的性能:經(jīng)內(nèi)鏡操作的順利性,并與傳統(tǒng)的活檢方法對比,定標(biāo)活檢鉗所取活檢標(biāo)本是否能滿足病理組織學(xué)檢查的要求.2、定標(biāo)液的性能:三種濃度、三種劑量的印度墨汁定標(biāo)后的可辨認(rèn)清晰度及可能引起的組織學(xué)炎癥反應(yīng)改變情況. 結(jié)果:定標(biāo)活檢鉗與用普通活檢鉗加內(nèi)鏡注射針相比,單次活檢內(nèi)鏡操作時間定標(biāo)活檢鉗為40秒,而用傳統(tǒng)活檢鉗為1分10秒.兩組共18塊組織用于活檢效果分析,兩組在活檢標(biāo)本的重量、大小、切取深度及滿足組織學(xué)檢查方面均相似(P>0.

5、05).定標(biāo)液濃度以印度墨汁1:10稀釋后每點(diǎn)注射0.5ml為最佳.定標(biāo)后15個月仍有較好的清晰度,局部炎癥反慮輕微可忽略.結(jié)論:定標(biāo)活檢鉗操作性能良好,操作順利,占用時間較短.定標(biāo)液用1:10濃度的印度墨汁0.5ml定標(biāo)最佳,局部組織無明顯改變. 三、臨床試驗: 試驗?zāi)康?為了驗證定標(biāo)活檢鉗在胃癌前期疾病患者中臨床使用的效果,探討其應(yīng)用價值. 試驗內(nèi)容:,對胃鏡下和病理已經(jīng)確診的慢性萎縮性胃炎的患者行胃竇小彎、

6、胃竇大彎、胃體小彎、胃體大彎、胃角共5點(diǎn)(印度墨汁1:10稀釋度0.3ml-0.5ml)進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)定標(biāo)活檢術(shù),根據(jù)臨床需要作定期隨訪復(fù)查胃鏡并行病理學(xué)檢查. 結(jié)果:對40例患者在定標(biāo)活檢后3個月至15個月隨訪,絕大多數(shù)患者定標(biāo)后未出現(xiàn)新的胃腸道不適表現(xiàn).經(jīng)藥物治療后已復(fù)查的13例,其中12例定標(biāo)點(diǎn)清晰(一例保持至15個月).組織學(xué)檢查未見明顯活動性炎癥反應(yīng),未見異物肉芽腫或壞死性炎癥.原有腺體萎縮或腸化病變變化不大,有一例有明顯改善

7、(中重度萎縮腸化轉(zhuǎn)變?yōu)檩p度). 結(jié)論:采用定標(biāo)活檢對胃癌前期病變監(jiān)測可行.1:10稀釋度0.3ml-0.5ml的印度墨汁定標(biāo)后能保持長時間清晰,所取樣本能滿足病理檢查需要,監(jiān)測反應(yīng)良好,未見明顯副反應(yīng).能夠解決胃癌前期病變監(jiān)測對技術(shù)的需要.四、命名定標(biāo)活檢技術(shù)(Marking Targeting Biopsy,MTB)申報產(chǎn)品專利和相關(guān)產(chǎn)品開發(fā)有關(guān)MTB技術(shù)相關(guān)論文發(fā)表在中華消化雜志和World Journal of Gastr

8、ocnterology.發(fā)明的定標(biāo)活檢鉗獲國家發(fā)明專利.相關(guān)產(chǎn)品兩個已開發(fā)試生產(chǎn),同時獲國家新型實用專利. §ⅡHsp在胃癌前期疾病和胃癌中的表達(dá)和意義探討 鑒于HSP在胃黏膜損傷及細(xì)胞凋亡增殖上的特異性作用,我們選擇了HSP60和HSP90這兩個與癌前期病變可能相關(guān)的指標(biāo)作為我們的研究對象,試圖為癌前病變癌變監(jiān)測尋找高陽性預(yù)測價值和陰性預(yù)測價值的生物學(xué)指標(biāo).本部分是通過兩個方面來開展實驗:一是對不同個體、不同疾病狀態(tài)分

9、層,觀察HSP90和HSP60的普通表達(dá);二是利用定標(biāo)活檢技術(shù)準(zhǔn)確地對同一個體不同疾病時期隨訪觀察HSP的特征表達(dá). 一、Hsp在不同個體不同疾病狀態(tài)下蛋白和mRNA表達(dá)水平的研究. 研究目的:探討HSP90和HSP60這兩個分子生物學(xué)指標(biāo)在不同癌前疾病狀態(tài)即慢性淺表性胃炎,慢性萎縮性胃炎和胃癌時的差異,以確定其在不同癌前狀態(tài)的預(yù)測價值. 研究內(nèi)容:對慢性淺表性胃炎、慢性萎縮性胃炎及胃癌人群分組分層研究,觀察HS

10、P90和HSP60在蛋白和mRNA水平的表達(dá). 材料與方法:對慢性萎縮性胃炎組的81例患者根據(jù)萎縮的輕、中、重程度分層分組,胃癌組59例,慢性淺表性胃炎組51例.HSP60和HSP90蛋白水平用免疫組化和Western-blot兩種方法檢測,HSP60和HSP90的mRNA表達(dá)水平用熒光實時定量PCR檢測. 結(jié)果:慢性淺表性胃炎、慢性萎縮性胃炎和胃癌三組在免疫組化結(jié)果觀察均有HSP90和HSP60的表達(dá).鏡下可見胃黏膜皺

11、襞上皮細(xì)胞的胞漿內(nèi)可見棕色的顆粒.各組細(xì)胞核中均無陽性表達(dá).HSP90和HSP60表達(dá)強(qiáng)度均以胃癌組最強(qiáng),慢性淺表性胃炎組較弱.HSP60在慢性萎縮性胃炎組表達(dá)較慢性淺表性胃炎組高但低于胃癌組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義.Western-blot結(jié)果發(fā)現(xiàn)HSP90蛋白在慢性萎縮性胃炎各組中隨萎縮加重而降低,胃癌時升高,但在各分組之間表達(dá)的差異無統(tǒng)計學(xué)意義.HSP60蛋白表達(dá)在輕度萎縮的患者中表達(dá)升高,隨萎縮加重又逐漸減低,但差異無統(tǒng)計學(xué)意義.胃癌

12、患者HSP60蛋白表達(dá)最高,與慢性淺表性胃炎相比,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05).HSP90mRNA在重度萎縮時下降,胃癌時上升,差異顯著,有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05).HSP60mRNA在輕度萎縮性胃炎組中表達(dá)升高,而胃癌組中表達(dá)更高,差異顯著,有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)結(jié)論:HSP60和HSP90可能成為監(jiān)測慢性萎縮性胃炎轉(zhuǎn)歸的生物學(xué)指標(biāo).當(dāng)HSP90的表達(dá)由低水平向高水平上升時,應(yīng)警惕增殖異常、癌變的可能.當(dāng)HSP60的表達(dá)上

13、升,提示持續(xù)性損害和增殖旺盛.聯(lián)合監(jiān)測HSP60和HSP90均表達(dá)上升時強(qiáng)烈提示增殖過度有癌變可能. 二、采用MTB技術(shù)對同一個體胃癌前疾病不同階段HSP蛋白和mRNA表達(dá)變化長期監(jiān)測的打算和預(yù)試驗. 研究目的:對胃癌前期病變患者長期隨訪,研究個體的疾病變化各階段HSP60,HSP90的變化,探討其預(yù)測癌變價值. 研究方法:采用MTB技術(shù)對胃癌前期病變患者進(jìn)行內(nèi)鏡下定標(biāo)活檢后長期隨訪.監(jiān)測其病理變化的同時對HSP

14、60,HSP90蛋白和mRNA表達(dá)作分析,比較不同時期疾病變化及治療后的轉(zhuǎn)歸. 結(jié)果:作為前瞻性研究的一種長期打算和預(yù)試驗,目前共有40例患者納入隊列中作長期監(jiān)測.其中30例有不同程度的腸化,1例有低級別黏膜內(nèi)瘤變.隨訪時間3-15個月不等,現(xiàn)已回訪患者13例,回訪的患者除一例中重度萎縮腸化轉(zhuǎn)變?yōu)檩p度有明顯好轉(zhuǎn)外,其余絕大多數(shù)原有病理學(xué)上萎縮和腸化程度沒有明顯改變.所取樣本都做了HSP蛋白和mRNA的檢測并輸入數(shù)據(jù)庫等待今后深入

15、分析. §Ⅲ建立胃癌前期病變癌變準(zhǔn)確監(jiān)測體系的思考和建議 胃癌癌前病變監(jiān)測的關(guān)鍵技術(shù)和有效指標(biāo)都是為了建立胃癌前期病變癌變準(zhǔn)確監(jiān)測體系.由于前兩部分的實驗取得了成效,今后我們可以應(yīng)用胃黏膜定標(biāo)活檢技術(shù)對同一個體胃癌前期病變組織進(jìn)行準(zhǔn)確定標(biāo)活檢和長期隨訪,建立群體組織數(shù)據(jù)庫,并聯(lián)合應(yīng)用現(xiàn)代分子生物學(xué)和生物信息學(xué)技術(shù)揭示胃癌前期病變癌變病理轉(zhuǎn)歸模式及相應(yīng)分子事件變化規(guī)律,提供各種癌變干預(yù)阻斷措施確切療效評估的技術(shù)平臺;同時篩