SHP-2與PI-3K-Akt傳導通路在急性白血病細胞中的表達及意義.pdf

1、在信號傳導過程中,蛋白質(zhì)中酪氨酸的磷酸化以及去磷酸化是非常重要的環(huán)節(jié).蛋白酪氨酸磷酸酶PTPs,是將磷酸化的信號分子的酪氨酸去磷酸化的激酶,同蛋白酪氨酸激酶PTKs一樣在信號傳導及控制細胞活性中發(fā)揮著重要的作用. SHP-2屬于蛋白酪氨酸磷酸酶(Protein Tyrosine Phosphatase,PTPase)家族中的一員,是一種含有SH2結(jié)構(gòu)域的酪氨酸蛋白磷酸酶,上個世紀九十年代由幾個實驗小組各自通過克隆的方法發(fā)現(xiàn),分別命名為S

2、HP-2、PTP1D、SH-PTP3、SH-PTP2以及Syp.SHP-2通過SH2功能域結(jié)合到酪氨酸磷酸蛋白質(zhì),使其自身結(jié)構(gòu)中的PTP酶激活,從而作為下游信號分子參與信號轉(zhuǎn)導,調(diào)節(jié)細胞增殖、分化、遷移、死亡,是細胞因子、抗原、細胞外基質(zhì)等的下游信號分子.近年來的一些實驗研究發(fā)現(xiàn),SHP-2在正常造血細胞生長和發(fā)育的有關信號通路中起十分重要的作用,同時在腫瘤細胞的粘附、胚胎細胞的發(fā)育中起著十分重要的作用. 眾多研究表明,SHP-

3、2在兩個重要的信號途徑PI-3K/Akt和Ras/Erk的上游將生長增殖信號傳遞給下游效應分子,正調(diào)控造血細胞的生長發(fā)育.PI-3K/Akt信號途徑由于促進腫瘤細胞的增殖、生存和抗凋亡,已被證實在許多腫瘤的發(fā)生和發(fā)展過程中起著重要的作用. 脂酰激醇-3-激酶(phosphoinositide 3-kinase,PI-3K)PI-3K是一種由110kDa催化亞單位和85kDa調(diào)節(jié)亞單位組成的異二聚體,包括2個SH2和1個SH3結(jié)構(gòu)

4、域,PI-3K激活與細胞骨架組裝、細胞分化、抗凋亡及葡萄糖吸收有關,其下游為Akt.pAkt是Akt的磷酸化形式.PI-3K/Akt途徑作為細胞內(nèi)重要信號轉(zhuǎn)導通路之一,通過影響下游凋亡相關蛋白、細胞周期調(diào)節(jié)蛋白等效應分子的活化過程,在細胞內(nèi)發(fā)揮著抑制凋亡、促進增殖的關鍵作用.PI-3K/Akt通路分子的基因突變,或上游調(diào)控信號的異常放大,均可導致該通路過度激活,細胞生存與凋亡失衡,正常細胞發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化.近年來的研究發(fā)現(xiàn),PI-3K/Ak

5、t通路的持續(xù)性活化在白血病發(fā)病中扮演著十分重要的作用.但目前國內(nèi)關于SHP-2和PI-3K/Akt途徑在急性白血病發(fā)病方面的文獻還鮮見報道. 本實驗應用S-P免疫細胞化學法對急性白血病患者單個核細胞中的SHP-2、PI-3K、pAkt的表達及相關性進行了研究,探討他們在急性白血病發(fā)病中的作用及與臨床特征之間的關系. [材料與方法]采集58例初治急性白血病患者骨髓標本后,使用Ficoll淋巴細胞分離液分離單個核細胞置備細胞

6、涂片,采用S-P免疫細胞化學法檢測骨髓單個核細胞中SHP-2、PI-3K、pAkt抗原的表達水平,15名健康人為正常對照. 1.研究對象:(1)初治白血病組(AL):共收集標本58例,其中男35例,女23例,年齡14-75歲,中位年齡35歲.將全部急性白血病患者分為兩組:①急性髓細胞白血病組(AMI.)41例,其中其中M<,0> 2例,M<,2> 23例,M<,3> 7例,M<,4> 3例,M<,5> 3例,M<,6> 2例,M

7、<,7> 1例;②急性淋巴細胞白血病組(ALL)17例;所有急性白血病患者均依據(jù)FAB分型診斷標準劃分.(2)完全緩解組(AL-CR):共35例,為初治組治療后部分完全緩解的患者骨髓標本.(3)對照組(Control):15例,為非惡性血液病骨髓正常者.所有觀察對象均取自于2006年4月至12月鄭州大學第一附屬醫(yī)院血液科門診及住院就診患者. 2.標本處理:化療前采集患者骨髓和對照者骨髓1ml,分離單個核細胞,制備細胞滴片,采用免

8、疫細胞化學法檢測SHP-2、pI-3K、pAkt的抗原表達在AL(Acuteleukemia)、AL-CR及正常對照者骨髓單個核細胞中的表達. 3.數(shù)據(jù)統(tǒng)計:實驗數(shù)據(jù)用SPSS11.0軟件進行統(tǒng)計學處理,SHP-2、PI-3K、pAkt的抗原表達陽性率比較采用X<'2>檢驗,變量間的相關分析應用Spearman等級相關分析,以a=0.05為檢驗水準. [結(jié)果]1 SHP-2在正常人骨髓標本中不表達或呈微弱表達.在AL組患者骨髓單

9、個核細胞中84.5﹪呈現(xiàn)細胞胞漿中的陽性和(或)強陽性表達,其中AML組陽性率為82.9﹪,ALL組陽性率為88.2﹪,兩組之間差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05).在AL-CR組中陽性率為31.4﹪,其中AML-CR組陽性率為29.2﹪,ALL-CR陽性率為36.4﹪,兩者之間差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05).AL組與正常對照組,AL,組與AL-CR組間差異有顯著統(tǒng)計學意義(P<0.01),且初治AML組與AML-CR組間及ALL與ALL

10、-CR組間差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05),AL-CR組與對照組間無統(tǒng)計學意義(P>0.05).@2 2.PI-3K在正常人骨髓標本中不表達或微弱表達.在初治AL患者骨髓單個核細胞中81.0﹪呈現(xiàn)細胞漿的陽性或強陽性表達,其中.AML組的陽性率為80.5﹪,ALL組的陽性率為82.3﹪,兩組之間差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05).在AL-CR中陽性率為48.6﹪,其中AMI,CR組陽性率為45.8﹪,ALL-CR組陽性率為54.5﹪,兩

11、者之間無統(tǒng)計學意義(P>0.05).AL組與正常對照組,AL組與AL-CR組間差異有顯著統(tǒng)計學意義(P<0.01),AL-CR組與對照組間差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05),且AML與AML-CR組間及ALL與ALL-CR組間差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05). 3.pAkt在正常人骨髓標本中不表達或微弱表達.在初治AL患者骨髓單個核細胞中60.3﹪呈現(xiàn)胞核或胞漿的陽性和(或)強陽性表達,以胞漿表達為主.其中AML組的表達陽性率為

12、58.5﹪,ALL組陽性率為64.7﹪,兩組之間差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05).在AL-CR組中陽性率為42.9﹪,其中AMbCR組陽性率為41.7﹪,ALL-CR組陽性率為45.5﹪,兩者之間差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05).AL組與正常對照組,AL組與AL-CR組間差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05);AL-CR組與對照組間差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05),且AML與AML-CR組間及ALL與ALL-CR組間差異均有統(tǒng)計學意義(P<0

13、.05). 4.相關性分析顯示PI-3K和‘pAkt呈正相關(r=0.477,P<0.05). 5.相關性分析顯示SHP-2和PI-3K呈正相關(r=0.338,P<0.05). 6.SHP-2蛋白表達水平與患者的年齡、性別、FAB分型無明顯相關性(P>0.05),但與白細胞高低及髓外浸潤特征呈正相關.1、SHP-2和PI-3K、pAkt在急性白血病細胞中呈過度高表達; 2、SHP-2與白血病細胞惡性增殖