多重耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌分子流行病學(xué)和耐藥機(jī)制研究.pdf

1、本文主要從以下幾個(gè)部分展開論述：
　　第一部分 多重耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌分子流行病學(xué)研究
　　目的:分析多重耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌(MDRAB)的分子流行病特征。
　　方法:收集2011-2013年復(fù)旦大學(xué)附屬華東醫(yī)院臨床分離96株鮑曼不動(dòng)桿菌。其中有55株多重耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌。應(yīng)用多位點(diǎn)序列分析(multilocus sequence typing，MLST)技術(shù)和脈沖場凝膠電泳（Pulsed-field gel electr

2、ophoresis，PFGE）對(duì)多重耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌進(jìn)行分子分型。應(yīng)用eBURST軟件對(duì)MLST結(jié)果進(jìn)行分析。
　　結(jié)果:MLST將55株表型為MDRAB鮑曼不動(dòng)桿菌分為5個(gè)ST型，其中3個(gè)型別為已發(fā)現(xiàn)的STs，即ST208、ST191和ST195。另2個(gè)型別為新發(fā)現(xiàn)的STs即STnl(1-3-G1-2-2-94-3)和STn2(1-12-3-71-2-145)，STn1獲得一個(gè)新的等位基因Gl，其gdhB等位基因12位和18位的

3、堿基T突變?yōu)镚。PFGE將55株MDRAB鮑曼不動(dòng)桿菌分為8個(gè)脈沖型，其中52株被分為A、B、C、D、E五個(gè)不同的克隆群。ST208、ST191、ST195、STn1組成了克隆復(fù)合體92(Clonal complex，CC92)。
　　結(jié)論:ST208和ST191是我院多重耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌最主要的ST分型，克隆復(fù)合體CC92為我院最主要的MDRAB流行克隆，CC92存在跨地區(qū)的傳播，且具有很強(qiáng)的耐藥性，這些菌株可以在臨床抗菌藥物壓

4、力下繼續(xù)存在，并具有引起院內(nèi)流行的能力。PFGE對(duì)菌株的分辨力要高于MLST，但MLST對(duì)菌株間的親緣關(guān)系判斷較為準(zhǔn)確。
　　第二部分 多重耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌耐藥狀況與分子機(jī)制研究
　　目的:分析多重耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌(MDRAB)的分子耐藥機(jī)制。
　　方法:收集臨床分離自住院患者的鮑曼不動(dòng)桿菌，用VITEK2 Compact全自動(dòng)細(xì)菌分析儀及藥敏紙片法分析菌株耐藥性。PCR和測序方法檢測耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌的耐藥相關(guān)基因。<

5、br>　　結(jié)果:CRAB組對(duì)頭孢他啶、頭孢噻肟、頭孢吡肟、頭孢哌酮/舒巴坦、哌拉西林/他唑巴坦、左氧氟沙星、慶大霉素、阿米卡星、多粘菌素的耐藥率要明顯高于CSAB組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。來源于ICU的菌株對(duì)哌拉西林/他唑巴坦、頭孢他啶、頭孢噻肟、左氧氟沙星、慶大霉素、頭孢吡肟、多粘菌素B的耐藥率要明顯高于非ICU科室。耐藥率差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。96株鮑曼不動(dòng)桿菌均天然攜帶blaOXA-66基因，其上游均未

6、檢測到ISAba1插入序列。CRAB和CSAB組blaOXA-23基因攜帶率分別為81.8％和7.9％，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，84.6％鮑曼不動(dòng)桿菌blaOXA-23基因上游檢測到存在ISAba1插入序列。CRAB和CSAB組Tn2008轉(zhuǎn)座子結(jié)構(gòu)陽性率分別為90.9％和17.5％，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。將52株攜帶Tn2008的鮑曼不動(dòng)桿菌與9株blaOXA-23陽性但Tn2008檢測陰性的鮑曼菌株對(duì)β內(nèi)酰

7、胺類抗生素耐藥率進(jìn)行比較，前者對(duì)亞胺培南的耐藥率明顯高于后者(P＜0.01)。96株鮑曼不動(dòng)桿菌均未檢測到其他CHDLs（blaOXA-24-like，blaOXA-58-like）、MBLs（blaIMP-type，blaVIM-type，blaSIM-1）以及Tn2006轉(zhuǎn)座子結(jié)構(gòu)。45.5％鮑曼不動(dòng)桿菌aac(6’)-Ib基因陽性。87.3％鮑曼不動(dòng)桿菌aph(3’)-Ia基因陽性，70.9％鮑曼不動(dòng)桿菌菌株aac(3)-Ia基因

8、陽性，其他氨基糖苷類抗生素耐藥相關(guān)基因如aac(6’)-Ih和aph(3’)-Ⅵ基因均檢測陰性。MDRAB的gyrA基因都有一個(gè)“熱點(diǎn)”突變，即83位絲氨酸(TCA)突變?yōu)榱涟彼?TTA)。ParC基因突變致使55株鮑曼不動(dòng)桿菌的80位絲氨酸(TCG)突變?yōu)榱涟彼?TTG)。此外，多重耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌中adeA、adeB和adeC基因檢測陽性率菌為100％。
　　結(jié)論:在本研究中，碳青霉烯水解D類β-內(nèi)酰胺酶blaOXA-23，b

9、laOXA-66是鮑曼不動(dòng)桿菌對(duì)碳青霉烯類抗生素耐藥的主要機(jī)制，Tn2008是ST208、ST191型多重耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌blaOXA-23的主要承載體。AAC(6’)-Ib氨基糖苷乙酰轉(zhuǎn)移酶、APH(3’)-Ⅰ磷酸轉(zhuǎn)移酶、AAC(3)-Ⅱ(aac(3)-Ia編碼）氨基糖苷乙酰轉(zhuǎn)移酶的產(chǎn)生為多重耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌對(duì)氨基糖苷類類抗生素耐藥的主要機(jī)制。喹諾酮耐藥決定區(qū)域的“熱點(diǎn)”(gyrA基因Ser83和ParC基因Ser80)突變?yōu)轷U曼不動(dòng)