黃芪注射液對人外周血內(nèi)皮祖細(xì)胞的影響及p38MAPK信號傳導(dǎo)機(jī)制研究.pdf

1、目的：觀察黃芪注射液(AMI)對人外周血內(nèi)皮祖細(xì)胞(endothelial progenitor cells，EPCs)的數(shù)量和遷移、黏附、體外血管生成能力的影響；以及對EPCs增殖、分化及細(xì)胞周期的影響。 方法：取健康成人空腹外周血10ml，用密度梯度離心法獲取單個(gè)核細(xì)胞(MNCs)，培養(yǎng)7天后，收集貼壁細(xì)胞，貼壁細(xì)胞隨機(jī)分成5組：(1)對照組；(2)AMI各濃度組(共4組)：在培養(yǎng)液中加入終濃度為0.2mg/ml、2mg/m

2、l、20mg/ml、200mg/ml AMI培養(yǎng)24h，其中20mg/ml組觀察不同時(shí)間(0h、6h、12h、24h、48h)。采用多波長激光共聚焦顯微鏡(laser scanning confocal microscope，LSCM)鑒定FITC-UEA-I和Dil-acLDL雙染色陽性細(xì)胞為正在分化的EPCs；倒置熒光顯微鏡對每孔EPCs進(jìn)行計(jì)數(shù)；流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞表型；改良的Boyden小室檢測EPCs遷移能力；黏附能力實(shí)驗(yàn)檢測E

3、PCs的黏附能力；體外血管生成試劑盒檢測EPCs的血管生成能力；MIT比色法檢測EPCs的增殖能力；流式細(xì)胞儀檢測EPCs分化和細(xì)胞周期分布。 結(jié)果： (1)AMI對外周血EPCs數(shù)量的影響：AMI明顯增加EPCs的數(shù)量，呈一定的量效與時(shí)效關(guān)系，EPCs數(shù)量在2 mg/ml濃度時(shí)開始較對照組明顯增加，在濃度為20mg/ml時(shí)最為顯著(P<0.01)；20mg/ml AMI作用6h后，EPCs數(shù)量開始明顯增加(P<0.05

4、)，24h達(dá)到高峰(P<0.01)，48h時(shí)略有下降，但仍明顯高于對照組(P<0.01)。 (2)AMI對外周血EPCs遷移能力的影響：AMI明顯增加EPCs的遷移能力，呈一定的量效與時(shí)效關(guān)系，2mg/ml濃度時(shí)開始明顯增強(qiáng)，20mg/ml時(shí)最為顯著(P<0.01)；20mg/ml AMI作用6h后，EPCs遷移能力開始明顯增強(qiáng)(P<0.05)，24h達(dá)到高峰(P<0.01)，48h時(shí)略有下降，但仍明顯高于對照組(P<0.01)

5、。 (3)AMI對外周血EPCs黏附能力的影響：AMI明顯增加EPCs的黏附能力，呈一定的量效與時(shí)效關(guān)系，在2 mg/ml濃度時(shí)開始較對照組明顯增強(qiáng)(P<0.01)，于20mg/ml時(shí)達(dá)最大效應(yīng)(P<0.01)。20mg/ml AMI作用6h后，EPCs黏附能力開始明顯增強(qiáng)(P<0.05)，24h達(dá)到高峰(P<0.01)，48h時(shí)略有下降，但仍明顯高于對照組(P<0.01)。 (4)AMI對外周血EPCs體外血管生成能力

6、的影響：AMI顯著增強(qiáng)了EPCs的體外血管生成能力，在濃度為20mg/ml時(shí)最為顯著(P<0.01)，并且形成的管腔樣結(jié)構(gòu)也較對照組復(fù)雜；20mg/ml AMI作用6h后，EPCs體外血管生成能力開始明顯增強(qiáng)(P<0.05)，于24h達(dá)到高峰(P<0.01)。 (5)AMI對外周血EPCs增殖的影響：AMI明顯增加EPCs的增殖能力，呈一定的量效與時(shí)效關(guān)系，在2 mg/ml濃度時(shí)開始較對照組明顯增強(qiáng)(P<0.01)，于20mg/

7、ml時(shí)達(dá)最大效應(yīng)(P<0.01)。20mg/ml AM/作用6h后，EPCs增殖能力開始明顯增強(qiáng)(P<0.01)，24h達(dá)到高峰(P<0.01)，48h時(shí)略有下降，但仍明顯高于對照組(P<0.01)。 (6)AMI對外周血EPCs細(xì)胞周期的影響：AMI2mg/ml濃度開始對EPCs細(xì)胞周期分布具有影響，與對照組比較，EPCs在G0/G1期的比例減少(P<0.05)，而S期和G2/M期的比例增高(P<0.05或0.01)，于AMI

8、 20mg/ml時(shí)達(dá)最大效應(yīng)(P<0.01)。 (7)AMI對外周血EPCs分化的影響：AMI 2mg/ml濃度開始促進(jìn)EPCs向內(nèi)皮細(xì)胞系分化，EPCs表達(dá)單核細(xì)胞表面標(biāo)志CD14+、CD64+細(xì)胞百分比明顯降低，而內(nèi)皮細(xì)胞特異性標(biāo)志vWF+細(xì)胞百分比明顯升高，(P<0.05或0.01)，在濃度為20mg/ml時(shí)達(dá)最大效應(yīng)。 結(jié)論： (1)AMI在體外能增加EPCs數(shù)量，作用呈濃度和時(shí)間依賴性； (2)