芪蛭皺肺顆粒對LPS致炎AT-Ⅱ細胞p38MAPK信號通路的影響.pdf

1、目的：原代培養(yǎng)新生大鼠肺泡Ⅱ型上皮細胞(alveolar typeⅡepithelial cell，AT-Ⅱ)，利用內(nèi)毒素（lipopolysaccharide，LPB）作用建立體外炎癥模型，通過芪蛭皺肺顆粒干預(yù)細胞，觀察AT-Ⅱ細胞形態(tài)學變化，p38MAPK信號通路基因的表達變化，探討芪蛭皺肺顆粒對慢性阻塞性肺疾?。╟hronic obstructive pulmonary disease，COPD）的作用機制，為開發(fā)研究芪蛭皺肺顆粒

2、提供藥效學基礎(chǔ)。
　　方法：取新生SPF級大鼠乳鼠肺臟，采用胰酶聯(lián)合膠原酶消化法獲取AT-Ⅱ細胞，分離純化后進行體外培養(yǎng)，用電鏡觀察鑒定AT-Ⅱ細胞。取生長狀況接近的同一代細胞，設(shè)置空白組、模型組（LPS20ug/ml）、低劑量組（LPS20ug/ml+芪蛭皺肺顆粒50 ug/ml）、中劑量組（LPS20ug/ml+芪蛭皺肺顆粒100 ug/ml）、高劑量組（LPS20ug/ml+芪蛭皺肺顆粒200 ug/ml）。電鏡觀察各組AT

3、-Ⅱ細胞生長狀態(tài)，透射電鏡觀察板層小體的變化，免疫組化法檢測SP-B，Q-PCR法定量檢測各組AT-Ⅱ細胞p38、SP-B及Fas基因表達水平，用Western Blot法半定量檢測各組AT-Ⅱ細胞p38、SP-B蛋白表達水平。
　　結(jié)果：
　　1、成功分離培養(yǎng)大鼠乳鼠原代AT-Ⅱ細胞，生長狀態(tài)良好；
　　2、LPS成功建立COPD體外炎癥模型，電鏡觀察細胞發(fā)現(xiàn)，與正常組對比，模型組AT-Ⅱ細胞板層小體減少，出現(xiàn)空泡樣

4、改變；與模型組對比，低、中、高劑量組板層小體減少不顯著，出現(xiàn)空泡樣改變減少；
　　3、與正常組對比，模型組SP-B基因表達降低，p38、FAS基因表達升高（P﹤0.05）；與模型組對比，芪蛭皺肺顆粒低、中、高劑量組能上調(diào)SP-B基因的低水平表達（P﹤0.05），下調(diào)p38、FAS基因的高水平表達。
　　結(jié)論：LPS干預(yù)原代培養(yǎng)大鼠乳鼠AT-Ⅱ細胞，可誘導 AT-Ⅱ細胞的炎性反應(yīng)，改變細胞超微結(jié)構(gòu)，建立COPD體外炎癥模型，芪