烏司他丁對(duì)急性腎損傷大鼠p38MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路影響的研究.pdf

1、目的：
　　通過(guò)分析大鼠急性腎損傷時(shí)及烏司他丁治療后腎組織TNF-α、TGF-β1和磷酸化p38MAPK蛋白表達(dá)水平的變化，研究烏司他丁是否對(duì)急性腎損傷大鼠有腎保護(hù)作用，有則進(jìn)一步探討烏司他丁是否通過(guò)對(duì)p38MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的影響來(lái)發(fā)揮作用的。
　　方法：
　　1.SPF級(jí)健康雄性SD大鼠40只，隨機(jī)分為5組，空白對(duì)照組、內(nèi)毒素組（LPS組）、烏司他丁治療組（LPS+UTI組）、p38MAPK阻斷劑干預(yù)組（LPS+

2、SB組）、烏司他丁和p38MAPK阻斷劑聯(lián)合干預(yù)組（LPS+UTI+SB組），每組8只。LPS按5mg/kg經(jīng)尾靜脈注射，UTI按10萬(wàn)U/kg經(jīng)腹腔左側(cè)注射，p38MAPK阻斷劑SB203580按5mg/kg經(jīng)腹腔右側(cè)注射，空白對(duì)照組則同樣部位注射等量的生理鹽水。干預(yù)24小時(shí)后取腎組織，分別在光鏡和電鏡下觀察腎組織和腎小球、近曲腎小管上皮細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化，并用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法檢測(cè)腎組織勻漿TNF-α和TGF-β1水平，以及用蛋白質(zhì)印

3、跡法檢測(cè)磷酸化p38MAPK蛋白的表達(dá)水平。
　　2.統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：采用SPSS16.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，所有計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差( x? s)表示，組間差異比較采用單因素方差分析，方差齊時(shí)，采用LSD-t檢驗(yàn)；方差不齊時(shí)則進(jìn)行數(shù)據(jù)變換后，組間比較仍采用LSD-t檢驗(yàn)，P＜0.05認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果：
　　1.病理切片觀察：空白對(duì)照組腎小球和腎小管結(jié)構(gòu)正常。LPS組腎小球充血腫脹，腎球囊擴(kuò)張，近曲腎小管

4、上皮細(xì)胞腫脹明顯，出現(xiàn)空泡變性現(xiàn)象，細(xì)胞核淡染，部分出現(xiàn)核固縮、破碎甚至溶解現(xiàn)象，腎間質(zhì)充血、水腫、大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。LPS+UTI組和LPS+SB組腎小球、近曲腎小管結(jié)構(gòu)損傷較LPS組減輕。LPS+UTI+SB組腎小球、近曲腎小管結(jié)構(gòu)基本正常，接近空白對(duì)照組。
　　2.電鏡切片觀察：空白對(duì)照組腎小球毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞、足細(xì)胞等結(jié)構(gòu)正常，近曲腎小管上皮胞質(zhì)內(nèi)含線粒體較多，結(jié)構(gòu)形態(tài)清晰，且嵴膜系統(tǒng)完整。LPS組腎小球足細(xì)胞足突廣泛融合

5、或消失，近曲腎小管上皮細(xì)胞腫脹明顯，胞質(zhì)內(nèi)線粒體排列紊亂，結(jié)構(gòu)模糊，高度腫脹，有空泡樣現(xiàn)象，嵴膜溶解缺失。LPS+UTI組和LPS+SB組腎小球足細(xì)胞足突部分融合，近曲腎小管上皮細(xì)胞輕微腫脹，胞質(zhì)內(nèi)線粒體結(jié)構(gòu)損傷程度較LPS組減輕。LPS+UTI+SB組腎小球毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞、足細(xì)胞和基底膜基本正常，近曲腎小管上皮細(xì)胞形態(tài)及結(jié)構(gòu)接近空白對(duì)照組。
　　3.各組腎組織TNF-α水平比較：LPS組的TNF-α水平較空白對(duì)照組顯著升高（P

6、﹤0.001）；分別經(jīng)UTI和SB203580干預(yù)后TNF-α水平明顯降低（P﹤0.001， P﹤0.001），但仍比空白對(duì)照組升高（P﹤0.01，P﹤0.01）；LPS+UTI+SB組的TNF-α水平較 LPS+UTI組和LPS+SB組均下降（P﹤0.05，P﹤0.05），與空白對(duì)照組接近（P=0.34）；而LPS+UTI組與LPS+SB組TNF-α水平接近（P=0.789）。
　　4.各組腎組織TGF-β1水平比較：LPS組的

7、TGF-β1水平較空白對(duì)照組升高非常顯著（P﹤0.001）；分別經(jīng)UTI和SB203580干預(yù)后TGF-β1水平明顯下降（P﹤0.001，P﹤0.001），但仍比空白對(duì)照組升高明顯（P﹤0.001，P﹤0.001）；LPS+UTI+SB組的TGF-β1水平較 LPS+UTI組和LPS+SB組均下降（P﹤0.001， P﹤0.001），但仍較空白對(duì)照組升高（P﹤0.05）；而LPS+UTI組與LPS+SB組的TGF-β1水平接近（P=0.

8、506）。
　　5.各組腎組織磷酸化p38MAPK蛋白的表達(dá)水平比較：LPS組的p-p38表達(dá)水平較空白對(duì)照組顯著升高（P﹤0.001）；分別經(jīng)UTI和SB203580干預(yù)后p-p38表達(dá)水平大大降低（P﹤0.001，P﹤0.001），但仍比空白對(duì)照組升高（P﹤0.001， P﹤0.01）；LPS+UTI+SB組p-p38表達(dá)水平較 LPS+UTI組和LPS+SB組均下降（P﹤0.001，P﹤0.05），接近空白對(duì)照組（P=0.4