烏司他丁對(duì)急性呼吸窘迫綜合征p38 MAPK信號(hào)通路作用機(jī)制的研究.pdf

1、目的：研究烏司他丁對(duì)內(nèi)毒素（LPS）誘導(dǎo)下的急性呼吸窘迫綜合征（ARDS）的影響，探討其治療ARDS的可能作用機(jī)制，為烏司他丁的臨床應(yīng)用提供進(jìn)一步理論基礎(chǔ)與實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：選用健康、雄性SD大鼠40只，隨機(jī)分成5組：正常對(duì)照組：在SD大鼠尾靜脈注射1ml生理鹽水；LPS組：在SD大鼠尾靜脈注射大腸桿菌內(nèi)毒素（LPS）5mg/Kg（使用前生理鹽水稀釋至1ml），復(fù)制ARDS模型；LPS+UTI組：造模方法同前，復(fù)制ARDS模型

2、后立刻于腹腔左側(cè)注射烏司他丁10萬(wàn)U/Kg（使用前生理鹽水稀釋至1ml）；LPS+SB203580組：造模方法同前，復(fù)制ARDS模型后立刻于腹腔右側(cè)注射p38 MAPK阻斷劑SB203580（5mg/Kg）（溶于0.1ml，10％二甲基亞砜DMSO，使用前用生理鹽水稀釋至1ml）；LPS+UTI+SB203580聯(lián)合組：造模方法同前，復(fù)制ARDS模型后立刻于腹腔左右側(cè)分別注射烏司他丁和SB203580（劑量計(jì)算方法同前）。
　　觀

3、察8h后，10%水合氯醛腹腔麻醉下開(kāi)腹分離腹主動(dòng)脈，抽取腹主動(dòng)脈血測(cè)PaO2，酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)測(cè)肺組織細(xì)胞因子TNF-ɑ的含量，蛋白印跡法(Western Blot)測(cè)肺組織p38 MAPK磷酸化蛋白表達(dá)程度，并行肺組織病理切片、電鏡片對(duì)照分析。
　　結(jié)果：
　　1.大鼠一般情況比較：正常對(duì)照組大鼠活動(dòng)自如，抓取時(shí)迅速逃避，精神狀態(tài)好，呼吸均勻；LPS組大鼠出現(xiàn)精神萎靡，呼吸急促，口唇發(fā)紺，鼠毛散亂，行走不穩(wěn)，

4、并可聽(tīng)到部分大鼠哮鳴音；LPS+UTI組、LPS+SB203580組及二者聯(lián)合組情況較LPS組好轉(zhuǎn)。
　　2.血?dú)夥治鼋Y(jié)果比較：LPS組PaO2明顯低于正常對(duì)照組，LPS+UTI組、LPS+SB203580組、LPS+UTI+SB203580聯(lián)合組PaO2均高于LPS組，以二者聯(lián)合組升高最為顯著，LPS+UTI組PaO2高于LPS+SB203580組。
　　3.各組肺組織TNF-ɑ含量的比較：LPS組與正常對(duì)照組相比肺組織T

5、NF-ɑ含量明顯升高，LPS+UTI組、LPS+SB203580組、LPS+UTI+SB203580聯(lián)合組肺組織TNF-ɑ含量均明顯低于LPS組，以二者聯(lián)合組最為顯著，LPS+UTI組肺組織TNF-ɑ含量低于LPS+SB203580組。
　　4.各組肺組織p38 MAPK磷酸化蛋白表達(dá)程度比較：LPS組與正常對(duì)照組相比肺組織p-p38 MAPK的表達(dá)明顯升高，LPS+UTI組、LPS+SB203580組、LPS+UTI+SB203

6、580聯(lián)合組肺組織p-p38 MAPK的水平均低于LPS組，以二者聯(lián)合組最為顯著，LPS+UTI組肺組織p-p38 MAPK的水平低于LPS+SB203580組。
　　5.TNF-ɑ、p-p38 MAPK的相關(guān)性分析：p-p38 MAPK與TNF-ɑ之間存在顯著正相關(guān)。
　　6.肺組織病理片比較：正常對(duì)照組：肺組織結(jié)構(gòu)完整、清晰，肺泡間隔均勻一致，無(wú)增厚；LPS組肺組織結(jié)構(gòu)破壞，肺泡狹窄、塌陷，肺泡間隔增厚，富含炎性細(xì)胞浸潤(rùn)

7、，同時(shí)可見(jiàn)肺微血管充血；LPS+UTI組、LPS+SB203580組、LPS+UTI+SB203580聯(lián)合組相比LPS組肺組織損傷有所減輕，炎性細(xì)胞在肺泡間隔浸潤(rùn)減少，肺泡間隔增厚有所減輕。
　　7.肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞電鏡片比較：正常對(duì)照組：肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)板層小體密度均勻，形態(tài)清晰完整；LPS組：肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)板層小體排空并且顯著，可見(jiàn)空泡化；LPS+UTI組、LPS+SB203580組及二者聯(lián)合組與LPS組相比

8、肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)板層小體排空及空泡化減輕。
　　結(jié)論：在本實(shí)驗(yàn)中，p-p38 MAPK的表達(dá)程度與TNF-ɑ含量成正相關(guān)，在ARDS模型中， TNF-ɑ含量和p-p38 MAPK的表達(dá)量明顯升高，PaO2明顯降低，經(jīng)烏司他丁、p38 MAPK特異性阻斷劑SB203580和兩者聯(lián)合治療后TNF-ɑ含量和p-p38 MAPK的表達(dá)量降低，PaO2上升，且兩者聯(lián)合治療比其單一治療效果更明顯，烏司他丁的療效優(yōu)于SB203580，由此