腸毒素大腸桿菌口服多價疫苗的研究.pdf

1、人源腸毒素大腸桿菌(enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)是引起發(fā)展中國家嬰幼兒和旅游者腹瀉的主要致病原.定居因子和腸毒素是ETEC腹瀉的主要致病因子和保護性抗原.定居因子血清型復(fù)雜、分布多樣,其中CFA/I、CS3和CS6分布最廣.腸毒素分為不耐熱腸毒素(heat-labile toxin,LT)和耐熱腸毒素(heat-stable toxin,ST).LT由A、B兩個亞基組成,B亞基為無毒性抗原

2、.ST為一小肽毒性蛋白,沒有免疫原性.該研究首先將優(yōu)勢血清型定居因子抗原CFA/I和CS6基因,構(gòu)建在同一質(zhì)粒上,依賴asd基因的宿主-載體平衡致死系統(tǒng),在減毒痢疾桿菌疫苗株中穩(wěn)定表達.動物實驗顯示該菌株采用CFA或LB培養(yǎng)、不同免疫劑量對最終產(chǎn)生的抗體反應(yīng),均達到了與單獨表達CFA/I和CS6菌株分別免疫和共同免疫相一致的免疫效果.同時ETEC抗原的表達不影響載體菌自身生長與免疫原性.以同樣的方法將優(yōu)勢血清型定居因子抗原CS3和融合腸

3、毒素LTB/STm(LT的B亞基與無毒的突變ST融合)基因構(gòu)建在減毒痢疾桿菌疫苗株中穩(wěn)定表達.結(jié)果表明在啟動子trc的作用下CS3達到了高效表達,在雙啟動子ompC和trc的作用下融合腸毒素的表達受滲透壓調(diào)節(jié),細胞的生長更穩(wěn)定快速,免疫效果良好.混合上述兩種疫苗菌株構(gòu)建ETEC多價活疫苗,免疫結(jié)果顯示該混合疫苗與各疫苗株的免疫原性無顯著差異,均能夠誘導(dǎo)機體產(chǎn)生針對ETEC定居因子CFA/I、CS3和CS6,腸毒素LTB、ST及載體菌自身