幽門螺桿菌多價(jià)口服核酸疫苗實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、研究目的:1、構(gòu)建ureB、napA、hpaA原核表達(dá)系統(tǒng),誘導(dǎo)表達(dá)并純化相應(yīng)蛋白UreB、NapA、HpaA,制備相應(yīng)蛋白抗血清,評價(jià)其免疫原性;2、構(gòu)建并鑒定融合基因ureB-napA-hpaA,將其導(dǎo)入真核表達(dá)載體pIRES,轉(zhuǎn)化活減毒鼠傷寒沙門菌SL7207,構(gòu)建UreB-NapA-HpaA口服重組DNA疫苗.研究結(jié)論:1、成功構(gòu)建原核表達(dá)系統(tǒng)BL21-CodonPlus(DE3)-pET-target gene,為IPTG誘導(dǎo)

2、高表達(dá)特定蛋白條帶.表達(dá)蛋白主要以包涵體形式存在于菌體沉淀,經(jīng)不同濃度尿素變性緩沖液成功粗純化.純化表達(dá)蛋白成功免疫小鼠并獲得相應(yīng)抗血清.抗血清能與所表達(dá)蛋白產(chǎn)生特異反應(yīng),效價(jià)分別為1:32 768,1:65 536及1:65 536,提示表達(dá)蛋白具有良好的免疫原性和免疫反應(yīng)性.2、成功構(gòu)建融合基因ureB-napA-hpaA,與GenBank中相應(yīng)核苷酸和蛋白質(zhì)序列具有高度同源性.重組質(zhì)粒pIRES-ureB-napA-hpaA轉(zhuǎn)染C