NOTCH4基因多態(tài)性與炎癥性腸病的相關(guān)性研究.pdf

1、背景：炎癥性腸病（IBD）包括潰瘍性結(jié)腸炎（UC）、克羅恩?。–D）和不確定性腸炎，是一類病因不明的慢性腸道非特異性炎癥性疾病。其發(fā)病機制不詳，可能為腸道細菌和環(huán)境因素作用于遺傳易感的人群,導致腸粘膜免疫反應(yīng)過高所致。傳統(tǒng)的流行病學研究顯示IBD具有遺傳易感性，其主要證據(jù)來源于不同人種的IBD發(fā)病率、家族聚集現(xiàn)象、雙生子的研究等。以后發(fā)展的全基因組掃描研究及IBD易感基因的研究，均證實IBD發(fā)病具有遺傳易感性。近年來，有關(guān)IBD遺傳因素

2、的研究取得了一些重要進展，確定了一些易感基因。例如，1996年發(fā)現(xiàn)位于16號染色體著絲粒附近的NOD2/ CARD15 基因是CD的第一個易感基因，其基因產(chǎn)物表達于單核細胞，它在炎癥的發(fā)生中可以與細菌的脂多糖和肽聚糖一起激活NF-κB。Stoll等證實位于10號染色體上的DLG5基因的兩個單倍體是CD的易感基因。一個加拿大研究組報道了位于5號染色體上的OCTN基因與CD相關(guān)。由此可見，IBD是一種復雜的多基因的遺傳易感性疾病。通過對該病

3、遺傳機制的認識，可確定或發(fā)現(xiàn)IBD易感基因或致病基因，對該病的基因治療、遺傳咨詢以及易感人群的合理預防起到重要作用。 既往研究顯示，NOD2/ CARD15基因、DLG5基因及OCTN基因多態(tài)性與歐美白種人群IBD 發(fā)病相關(guān)。日本和香港的研究顯示NOD2/ CARD15基因多態(tài)性不存在于亞洲人群，我國人群的小樣本研究也證實NOD2/ CARD15在中國人群無多態(tài)性。日本人群遺傳學研究顯示DLG5、OCTN與日本人群CD 無顯著相

4、關(guān)，但亞洲人群DLG5、OCTN與UC 的相關(guān)研究未見報道。因此，找到與我國人群IBD 相關(guān)的基因成為目前IBD 研究的熱點。研究發(fā)現(xiàn)位于6p21.3 的HLA 基因群上多個位點與炎癥性腸病相關(guān)。HLA 是一群緊密連鎖的基因群，共分三個區(qū)域。它們編碼的抗原，決定著機體的組織相容性且與免疫應(yīng)答和免疫調(diào)節(jié)相關(guān)。NOTCH4 基因位于其第Ⅲ區(qū)，富含多種多態(tài)性。NOTCH4 基因作為HLA上的一個重要位點，自然也成為炎癥性腸病的一個候選基因。

5、 目的：檢測我國漢族人群NOTCH4基因（rs915894 C/A, rs422951 A/G 與rs1044506 C/A）的遺傳多態(tài)性及其與IBD 的相關(guān)性。以已知IBD 相關(guān)基因DLG5、OCTN及NOD2 / CARD15 為對照。 方法：采用PCR-SSP、PCR-RFLP技術(shù)及DNA序列測定，對138例UC、63例CD患者以及186例健康對照的NOTCH4 基因（rs915894 C/A, rs422951 A

6、/G 與rs1044506 C/A）、DLG5 基因（rs1248696 G/A，rs2289310 C/A）、OCTN 基因(rs1050152 C/T，rs2631367 G/C)及NOD2 / CARD15 基因(rs2066844 C/T，rs2066845 G/C)的遺傳多態(tài)性進行分析。并收集50例UC患者病變部結(jié)腸組織及32例結(jié)腸癌患者手術(shù)后標本兩端的正常粘膜組織，用免疫組化方法檢測Notch4在結(jié)腸粘膜組織中的表達情況。數(shù)

7、據(jù)統(tǒng)計使用SAS軟件進行χ2檢驗和單倍體分析。 結(jié)果：① NOTCH4 基因rs915894C/A, rs422951A/G 與rs1044506 C/A在我國人群中存在遺傳多態(tài)性，這3 個位點各自的遺傳多態(tài)性與IBD 的發(fā)病無相關(guān)性。但對rs915894 C/A 和rs422951 A/G 位點進行單倍體分析時發(fā)現(xiàn)這兩個位點的CA 單倍體型可能與CD 相關(guān)（P=0.0004）。② DLG5 基因（rs1248696 G/A）、

8、OCTN 基因(rs1050152 C/T，rs2631367 G/C)及NOD2/ CARD15 基因(rs2066844 C/T，rs2066845 G/C)在我國人群中不存在遺傳多態(tài)性。DLG5基因（rs2289310 C/A）在我國人群中存在多態(tài)性，但與IBD 的發(fā)病無顯著相關(guān)。③免疫組化結(jié)果顯示，UC 患者Notch4 表達陽性率為64.0％。對照的結(jié)腸癌患者正常粘膜組織Notch4 表達陽性率為59.4％。UC 患者病變結(jié)腸

9、組織與對照者的正常結(jié)腸組織中Notch4 的表達是無差異的，且Notch4 在UC 患者腸粘膜組織中的表達與疾病嚴重程度及病變部位無關(guān)( P >0．05)。 結(jié)論：本研究發(fā)現(xiàn)① NOTCH4 基因rs915894C/A 和rs422951A/G位點與我國漢族人群CD的發(fā)病有相關(guān)性。但與UC無關(guān)。② NOTCH4 基因rs915894C/A 和rs422951A/G位點與我國漢族人群UC發(fā)病無關(guān)，UC組織學上Notch4表達亦無特