小型豬痰瘀互結(jié)證冠心病模型的病理學(xué)研究及中藥方劑的干預(yù)作用.pdf

1、冠心病是危害中、老年人的嚴重疾病之一,在許多國家和地區(qū)的發(fā)病率和死亡率都很高,已成為嚴重危害人類健康的疾病。因此,抗冠心病藥物的研究在世界各國日益受到重視。我國傳統(tǒng)方藥對冠心病保護作用的研究也日益受到重視。
　　 對冠心病的研究,建立理想的動物模型必不可少。本實驗室選用中國實驗小型豬采用介入法球囊拉傷冠狀動脈左前降支配合高脂飼料喂養(yǎng),獲得痰瘀互結(jié)證冠心病模型,其病理過程與人類極相似。
　　 本實驗室在中國小型豬痰瘀互結(jié)證

2、冠心病模型上,選用瓜蔞薤白半夏湯合血府逐瘀湯作為痰瘀同治方、瓜蔞薤白半夏湯作為化痰方、血府逐瘀湯作為祛痰方進行治療,對此模型給予三種不同的傳統(tǒng)方藥,探討了方證相應(yīng)理論的規(guī)律與本質(zhì)(詳見李欣志博士論文)。本實驗在此基礎(chǔ)上,對此模型的冠狀血管損傷節(jié)段和梗死交界區(qū)心肌,進行病理形態(tài)學(xué)分析；并觀察傳統(tǒng)方藥對冠狀動脈及心肌的病理形態(tài)學(xué)的干預(yù)作用。并觀察心肌凋亡細胞及bax、bcl-2、caspase-3、caspase-9表達在模型中的變化,并觀

3、察傳統(tǒng)方藥對心肌凋亡細胞及bax、bcl-2、caspase-3、caspase-9表達的干預(yù)作用。材料和方法:
　　 30只中國實驗小型豬(Chinese experimental miniature swine,CEMS)隨機分為6組:(1)正常對照組(Con):普通飼料,不拉傷冠狀血管,n=5；(2)痰瘀互結(jié)證候模型組(Model):冠狀動脈拉傷+高脂飼料,n=5；(3)西藥對照組(XY):冠狀動脈拉傷+高脂飼料+辛伐他汀

4、0.5mg/kg,n=5；(4)化痰組(HT):冠狀動脈拉傷+高脂飼料+瓜蔞薤白半夏湯6g生藥/kg,n=5；(5)祛瘀組(QY):冠狀動脈拉傷+高脂飼料+血府逐瘀湯8g生藥/kg,n=5；(6)痰瘀同治組(TY):冠狀動脈拉傷+高脂飼料+瓜蔞薤白半夏湯3g生藥/kg合血府逐瘀湯4g生藥/kg,n=5。冠狀動脈拉傷后第2天開始給藥,同時繼續(xù)喂養(yǎng)高脂飼料,持續(xù)8周。
　　 實驗結(jié)束后,取實驗各組的冠狀血管損傷節(jié)段和梗死交界區(qū)心肌制

5、成石蠟切片。用H.E染色法、彈力纖維EVG染色法、計算機圖像分析系統(tǒng)、用SPSS11.5統(tǒng)計軟件對受損血管管腔內(nèi)膜增生及狹窄情況進行形態(tài)學(xué)觀察、數(shù)據(jù)測量和數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析:用H.E染色法和Masson三色染色法對受累心肌進行形態(tài)學(xué)分析。用TUNEL標記法識別心肌凋亡細胞,用免疫組織化學(xué)染色法表達bax、bcl-2基因蛋白和caspase-3、caspase-9蛋白酶,觀察心肌凋亡細胞及bax、bcl-2、caspase-3、caspase-

6、9表達在模型中的變化,并觀察中藥方劑對心肌細胞凋亡及bax、bcl-2、caspase-3、caspase-9表達的影響。
　　 結(jié)果:
　　 1、模型組冠狀動脈管腔出現(xiàn)不同程度的偏心性狹窄,與對照組相比,差異極顯著(P<0.01)。各給藥組冠狀動脈管腔仍有不同程度的狹窄,但與模型組有顯著減輕,其中化痰組、祛瘀組、痰瘀同治組有極顯著差異(P<0.01),西藥組有明顯差異(P<0.05)。
　　 2.模型組心肌內(nèi)可

7、見大片狀心肌纖維斷裂缺失,并被纖維組織填充替代,部分伴灶狀肌纖維變性壞死、脂肪浸潤及少數(shù)炎性細胞浸潤,與對照組相比,差異極顯著(P<0.01)。各給藥組,較模型組有明顯減輕,其中化痰組、西藥組有極顯著差異(P<0.01),祛瘀組、痰瘀同治組有明顯差異(P<0.05)。
　　 3.用計算機圖像分析軟件測量冠狀動脈并進行統(tǒng)計學(xué)分析發(fā)現(xiàn):模型組管腔與對照組管腔相比顯著狹窄(P<0.01)；模型組的管腔最大內(nèi)膜厚度與對照組相比明顯增厚(

8、P<0.01)；模型組的管腔最大內(nèi)膜厚度與中膜厚度的比值明顯大于對照組(P<0.01)。各給藥組冠狀動脈管腔狹窄程度明顯輕于模型組(P<0.01)；各給藥組的管腔最大內(nèi)膜厚度明顯比模型組薄(P<0.01)；各給藥組的管腔最大內(nèi)膜厚度與中膜厚度的比值顯著小于模型組(P<0.01)。
　　 4.模型組bcl-2基因蛋白表達和bcl-2/bax的比值均明顯低于對照組(P<0.01),bax基因蛋白表達比對照組明顯增強(P<0.01)；

9、痰瘀同治組bcl-2基因蛋白表達和bcl-2/bax的比值均顯著高于模型組(P<0.01),bax基因蛋白表達較模型組顯著降低(P<0.01)。
　　 5.模型組caspase-3、caspase-9表達均明顯比對照組增強(P<0.01)；痰瘀同治組caspase-3、caspase-9表達均顯著低于模型組(P<0.01)。
　　 6.TUNEI,法檢測各組心肌細胞凋亡情況:對照組、模型組及痰瘀同治組的凋亡指數(shù)(apop

10、tosis index,AI)分別為0.92％、27.68％及17.28％,模型組和痰瘀同治組的凋亡細胞數(shù)均比對照組的多,凋亡指數(shù)均大于對照組(P<0.01)；模型組和痰瘀同治組相比,前者的凋亡細胞數(shù)明顯多于后者且凋亡指數(shù)也大于后者(P<0.01)。
　　 結(jié)論
　　 1.從病理學(xué)角度證實了中國小型豬痰瘀互結(jié)證冠心病模型的成立。
　　 2.傳統(tǒng)方藥對痰瘀互結(jié)證冠心病模型有明顯的防治效果。
　　 3.傳統(tǒng)方