特異性平滑肌p27基因對頸動脈支架術后再狹窄的影響及機制研究.pdf

1、本文主要從以下三個方面展開論述：
　　第一部分
　　目的：研究表明藥物涂層支架術后再狹窄的形成主要表現(xiàn)為內膜增生和血管重塑，而血管平滑肌細胞（VSMCs）的過度增殖在其中起到了重要作用。本研究旨在通過構建SM22alpha-p27-EGFP重組慢病毒載體，探討SM22alpha啟動子對VSMCs p27蛋白過表達及特異性選擇作用，選擇重組慢病毒感染細胞最適宜MOI，為慢病毒調控細胞周期機制研究提供進一步依據。
　　方法

2、：鼠尾基因組釣取sm22alpha，構建攜帶p27基因的慢病毒和無p27基因的對照空病毒。感染原代培養(yǎng)平滑肌細胞和內皮細胞，流式細胞術確定病毒的選擇性感染能力及感染復數；免疫熒光法和Western Blot檢測p27基因在兩種細胞中的表達及細胞形態(tài)變化。
　　結果：1）從大鼠基因組中提取SM22alpha啟動子，構建 SM22alpha-p27-EGFP及SM22alpha-null-EGFP重組慢病毒，病毒滴度為5×108U/m

3、l。2）FACs示 SM22alpha啟動子具有平滑肌細胞特異性選擇作用，選定最適MOI為103）免疫熒光染色示SM22alpha promoter-p27-EGFP病毒能夠有效過表達p27蛋白4）Western Blot提示p27蛋白過表達且證實存在重組蛋白。
　　結論：SM22alpha啟動子介導的重組慢病毒載體具有平滑肌特異性選擇作用且能夠有效過量表達p27蛋白。
　　第二部分
　　目的：第一部分的研究表明，重組

4、慢病毒SM22alpha-p27-EGFP能夠選擇性感染平滑肌細胞并過表達p27蛋白。本部分研究同紫杉醇相比，重組慢病毒是否能夠通過p27的過表達有效達成細胞周期阻滯、抑制細胞增殖的作用。探討重組慢病毒和紫杉醇對細胞周期調控機制，為臨床DES改進提供新的思路。
　　方法：BrdU染色分析紫杉醇與重組慢病毒對血管平滑肌細和血管內皮細胞增殖能力的影響。采用流式細胞術檢測正常培養(yǎng)和不同藥物干預組血管內皮細胞和血管平滑肌細胞細胞周期分布。

5、
　　結果：BrdU結果示平滑肌細胞組中：紫杉醇與SM22alpha-p27過表達病毒均能夠有效抑制vsmc增殖（p<0.05）,其中紫杉醇與過表達病毒對于vsmc增殖的抑制更加明顯（p<0.01）；內皮細胞組，紫杉醇能夠有效抑制 vsmc增殖（p<0.05）,但陰性對照病毒及過表達病毒抑制增殖能力并沒有統(tǒng)計學意義。流式結果示紫杉醇干預后的內皮細胞和平滑肌細胞均表現(xiàn)出G2/M期阻滯現(xiàn)象，伴隨S期分布減少，G0/G1期細胞分布減少（