諾氟沙星模擬表位的淘選、應(yīng)用及針對(duì)小分子噬菌體隨機(jī)肽庫的建立.pdf

1、諾氟沙星為氟喹諾酮類藥物,過度服用會(huì)造成細(xì)菌的耐藥性。本研究以抗NFLX單抗為靶分子,采用噬菌體展示技術(shù)淘選到了NFLX模擬表位,并建立了基于NFLX模擬表位建立起了Phage-ELISA和Phage-CLEIA這兩種免疫學(xué)檢測(cè)方法。同時(shí)構(gòu)建了一個(gè)噬菌體隨機(jī)環(huán)七肽庫用于小分子模擬表位的淘選。
　　1、NFLX模擬表位淘選、鑒定及測(cè)序
　　以抗NFLX單抗為靶分子,從噬菌體環(huán)七肽庫和十二肽庫中淘選得到了NFLX模擬表位,經(jīng)測(cè)序

2、后得到12種序列: NKLRLPF、TPSRLPF、KFGFEPF、TWKNLPF、PIHRAPF、NTARWPF、SPLRAPF、NWSRLPF、GPLYPGPFHTSH、ADWHQKFQMHSR、SRMGPENWDKWY、DHAYWPKFWGKA,其中從環(huán)七肽庫中淘選的模擬表位的共有序列為X-X-X-X-X-P-F,X為任意氨基酸。
　　2、基于NFLX模擬表位的Phage-ELISA分析法的建立
　　以H3噬菌體粒子建

3、立NFLXPhage-ELISA,方法的IC50值為56.1ng/mL,線性檢測(cè)范圍為10.0~400.0ng/mL,批內(nèi)變異系數(shù)(coefficient variations of intra-assay and inter-assay)為5.7％,批間變異系數(shù)(coefficient variation of inter-assay)為7.3%。加標(biāo)濃度為300、600、1000μg/kg,回收率范圍為70.4~120.3%,變異系

4、數(shù)為6.9~9.3%。
　　3、基于NFLX模擬表位的Phage-CLEIA分析法的建立
　　以H3噬菌體粒子建立NFLX Phage-CLEIA,IC50值為41.7ng/mL,線性檢測(cè)范圍為5.0~400.0ng/mL。批內(nèi)變異系數(shù)(coefficient variations of intra-assay and inter-assay)7.2%,批間變異系數(shù)(coefficient variation of inte