利用噬菌體12肽庫篩選生長抑素的抗原模擬表位.pdf

1、生長抑素（SS）是由下丘腦分泌的一種含14個氨基酸殘基的短肽類激素，其主要生理作用是抑制生長激素的分泌。 本研究主要工作及結(jié)果如下： 1．構(gòu)建了pET-32a-ss表達(dá)質(zhì)粒，轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21（BE3），用IPTG進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)，SDS-PAGE檢測表明，ss基因在大腸桿菌中實現(xiàn)了融合表達(dá)，蛋白分子量約為23.4 KD。 2．用疫苗“激生1號”免疫日本大耳兔獲得抗生長抑素血清，飽和硫酸銨粗提IgG，再經(jīng)DE

2、AE-sephadex-A50低壓層析系統(tǒng)純化IgG，最后用SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測其純度，并用放射免疫法檢測SS抗體的含量。以純化后的SS IgG作為篩選配基，用蛋白競爭洗脫法結(jié)合陰性血清吸附的方法，對噬菌體隨機(jī)12肽庫進(jìn)行了四輪淘洗，隨機(jī)挑取22個藍(lán)色噬菌斑擴(kuò)增后，用ELISA初步鑒定，發(fā)現(xiàn)有6個噬菌斑克隆與SS抗體有較強(qiáng)的特異性結(jié)合，通過進(jìn)一步的競爭抑制ELISA，仍有較好的抑制效果。將該6個陽性克隆提取ssDNA進(jìn)行測序與