噬菌體肽庫中乳腺癌腫瘤抗原的篩選.pdf

1、目的：為獲得新的乳腺癌腫瘤抗原，用乳腺癌患者血清抗體對噬菌體隨機12 肽庫 進行篩選，以期獲得能夠模擬乳腺癌腫瘤抗原并能與乳腺癌患者血清抗體特異結合的活性小肽。 方法：利用乳腺癌患者血清抗體對噬菌體隨機12 肽庫進行液相Bio-panning，篩選能與乳腺癌患者血清抗體特異性結合的小肽(P)。將編碼小肽的DNA 片段克隆到表達載體Pgex-4T-1 中。經(jīng)大腸桿菌BL21 表達GST-P 融合蛋白。擴大血清樣本例數(shù)，行

2、ELISA檢測融合蛋白與乳腺癌血清抗體結合的特異性。用融合蛋白免疫BALB/c 小鼠，制備抗GST-P 的小鼠抗血清。利用親和吸附技術，除去多抗血清中抗GST 成分增強其抗小肽的特異性后行免疫組織化學檢查，初步了解小肽在乳腺惡性腫瘤組織的表達情況。利用生物信息學技術，尋找與小肽同源性最高的人源蛋白及其他相關蛋白，并通過RT-PCR實驗初步檢測其同源蛋白在乳腺癌組織的表達情況。 結果：從噬菌體隨機12 肽庫中篩得3 例與乳腺癌患

3、者血清結合活性較高的小肽P3、P4 和P15。構建并表達純化了相應的融合蛋白GST-P3、GST-P4 和GST-P15。ELISA檢測顯示融合蛋白GST-P3、GST-P4 和GST-P15 與乳腺癌患者血清抗體的結合活性整體較強。制備抗GST-P3、抗GST-P4 和抗GST-P15 的小鼠抗血清，去除非特異抗體成份后，通過免疫組織化學實驗初步證實小肽P3、P4 和P15 在乳腺癌組織的表達水平較高。用BLAST在線分析軟件從Gen

4、Bank 中得到與小肽P3、P4 和P15 同源性較高的蛋白CDC27、PTPN22 和HCV。設計合成了cdc27 片段的引物，利用RT-PCR 技術初步證實了cdc27在乳腺癌組織中的表達高于癌旁組織。 結論：從噬菌體隨機12 肽庫中獲得了與乳腺癌患者血清抗體結合活性較強的小肽P3、P4 和P15。3 例小肽在乳腺惡性組織中的表達水平較高。這一結果為尋找新的乳腺癌腫瘤抗原奠定了基礎。小肽P3 的同源蛋白CDC27 在乳腺癌