人肝門(mén)部膽管癌裸鼠肝門(mén)移植模型的建立及CD、HSV-tk雙自殺基因治療實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、山東大學(xué)博士學(xué)位論文人肝門(mén)部膽管癌裸鼠肝門(mén)移植模型的建立及CD、HSV-tk雙自殺基因治療實(shí)驗(yàn)研究姓名：李志偉申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：普外科指導(dǎo)教師：王占民20040315山東大學(xué)博士學(xué)位論文第一部分人肝門(mén)部膽管癌裸鼠肝門(mén)移植模型的建立及其生物學(xué)特性研究博士研究生博士生導(dǎo)師李志偉王占民教授中文摘要目的 建立人肝門(mén)部膽管癌裸鼠肝門(mén)移植模型，對(duì)其生物學(xué)特性進(jìn)行初步探討。方法收集第9 0 代肝門(mén)部膽管癌細(xì)胞系F R H 細(xì)胞( 2 X 1 0

2、 6 ) 接種于6 只B a l b ／c 裸鼠后肢背側(cè)皮下，兩周左右，有5 只B a l b ／c 裸鼠后肢背側(cè)皮下移植瘤長(zhǎng)至約8 m m×6 m m ．切取裸鼠皮下移植瘤邊緣直徑約l m m 組織塊植入B a l b ／c 裸鼠肝門(mén)部肝實(shí)質(zhì)內(nèi)，共3 2 只，觀察裸鼠生活情況。每周取兩只裸鼠在麻醉下剖腹探查，觀察肝門(mén)部腫瘤生長(zhǎng)狀況，測(cè)量腫瘤直徑，計(jì)算腫瘤體積，繪制裸鼠腫瘤生長(zhǎng)曲線。待裸鼠出現(xiàn)黃疸，全身衰竭時(shí)，予以處死，抽血檢

3、查肝功能；解剖肝門(mén)部腫瘤及觀察周?chē)?rùn)情況，有、無(wú)遠(yuǎn)處臟器轉(zhuǎn)移并行病理檢查。裸鼠肝門(mén)部移植瘤與人肝門(mén)部膽管癌標(biāo)本進(jìn)行比較，觀察腫瘤病理結(jié)構(gòu)；透射電鏡觀察腫瘤細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)；免疫組化檢測(cè)V E G F 、b F G F 、P C N A 、b c l - 2 、F a s 、P 5 3 、P 2 1 、M M P - 9 、T I M P —l 、T I M P 一2 、C D 3 4 表達(dá)情況，測(cè)定腫瘤微血管密度( M V D ) ，。結(jié)

4、果3 2 只裸鼠建成3 0 只肝門(mén)部腫瘤移植模型，成瘤率9 4 ％；建成的3 0 只模型中2 8 只出現(xiàn)黃疸，黃疸出現(xiàn)率為9 3 ％。接種后2 周左右可觸及肝門(mén)部有小結(jié)節(jié)，平均4 周左右出現(xiàn)黃疸，6 周左右裸鼠開(kāi)始出現(xiàn)惡液質(zhì)。解剖發(fā)現(xiàn)肝門(mén)部有腫瘤生長(zhǎng)，腫瘤生長(zhǎng)較快，長(zhǎng)徑1 ．8 ～2 ．8 c m ，包膜不完整，向周?chē)M織浸潤(rùn)。主要向肝實(shí)質(zhì)內(nèi)生長(zhǎng)，8 例侵及膽囊，6 例浸及肝門(mén)血管，3 例腹腔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。腎臟、脾臟、胃腸、肺臟未見(jiàn)轉(zhuǎn)移灶

5、。肝功能檢查顯示：A L T 8 6 + 2 8 ．7 U ／L ，A S T 9 8 + - - - 3 1 ．3 U ／L ，G G T1 2 2±4 1 ．6 U ／L ，A L P1 6 8 ±6 5 ．8 U ／L ，T B I L 3 5 ±1 3 ．6 p m o l ／L ，D B I L 3 1 ±1 1 ．5 u m o l ／L ，均明顯高于正常對(duì)照組。肝門(mén)腫瘤H E 染色呈