二十五味珊瑚丸治療偏頭痛的主要作用機(jī)制研究.pdf

1、研究背景:
　　 偏頭痛(migraine)是一種發(fā)作性、搏動(dòng)樣、多為偏側(cè)、中重度原發(fā)性頭痛，常伴有惡心、嘔吐、畏光、畏聲及視覺(jué)、感覺(jué)、言語(yǔ)、運(yùn)動(dòng)缺損或刺激癥狀，是臨床常見(jiàn)的慢性神經(jīng)血管性疾患之一。世界各國(guó)報(bào)道的偏頭痛的年患病率不同，女性大致為3.3％～32.6％，男性大致為0.7％～16.1％[1]。它發(fā)作頻繁，嚴(yán)重影響患者的身心健康、日常生活和工作學(xué)習(xí)[2];耗資巨大，給國(guó)家和患者帶來(lái)沉重的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)[3]。世界衛(wèi)生組織(WH

2、O)發(fā)布的2001年世界衛(wèi)生報(bào)告將常見(jiàn)疾病按健康壽命損失年進(jìn)行排列，偏頭痛位列第19位，并將嚴(yán)重偏頭痛定為最致殘的慢性疾病，類同于癡呆、四肢癱瘓和嚴(yán)重精神病[4]。
　　 藏醫(yī)學(xué)是中華民族醫(yī)學(xué)的瑰寶之一，幾千年來(lái)經(jīng)過(guò)無(wú)數(shù)藏醫(yī)藥學(xué)家醫(yī)療實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)的積累和升華，逐漸形成了一套獨(dú)特的診療偏頭痛的理論體系。二十五味珊瑚丸治療偏頭痛，臨床經(jīng)驗(yàn)豐富，治療效果確切，非常值得推廣與應(yīng)用。但是，目前二十五味珊瑚丸治療偏頭痛的研究工作主要集中在臨床領(lǐng)

3、域，基礎(chǔ)研究基本處于空白狀態(tài)，尤其是現(xiàn)代藥理藥效學(xué)研究完全沒(méi)有開(kāi)展;同時(shí)，偏頭痛的現(xiàn)代醫(yī)學(xué)發(fā)病機(jī)制尚不清楚，各種學(xué)說(shuō)都存在不同程度的局限性，僅能從某一方面對(duì)偏頭痛的發(fā)病機(jī)制進(jìn)行闡釋。因此，為了探索二十五味珊瑚丸治療偏頭痛的機(jī)制，深入挖掘二十五味珊瑚丸治療偏頭痛的優(yōu)勢(shì)，積極開(kāi)展本項(xiàng)研究工作迫在眉睫，勢(shì)在必行。
　　 研究方法:
　　 1.二十五味珊瑚丸對(duì)小鼠中樞性疼痛的影響
　　 SPF級(jí)昆明小鼠80只，雌性，于熱

4、盤(pán)痛覺(jué)測(cè)試儀上記錄每只小鼠首次舔后足或跳躍時(shí)間（秒），凡首次舔后足或跳躍時(shí)間小于5秒、大于30秒者棄之不用。篩選合格小鼠64只，隨機(jī)等分為8組，各組分別為空白組，二十五味珊瑚丸低劑量組、中劑量組、高劑量組，正天丸組，鹽酸氟桂利嗪膠囊組，二十五味珊瑚丸加正天丸組和二十五味珊瑚丸加鹽酸氟桂利嗪膠囊組?？瞻捉M每天生理鹽水灌胃1次，給藥組每天灌胃給藥1次，連續(xù)灌胃10天。分別于末次灌胃后1小時(shí)、2小時(shí)在熱盤(pán)痛覺(jué)測(cè)試儀上記錄每只小鼠首次舔后足或跳

5、躍時(shí)間（秒）。若時(shí)間超過(guò)60秒，即停止測(cè)試而按60秒計(jì)。
　　 2.二十五味珊瑚丸對(duì)小鼠外周性疼痛的影響
　　 SPF級(jí)昆明小鼠80只，雌雄各半，隨機(jī)等分為8組，分組情況同二十五味珊瑚丸對(duì)小鼠中樞性疼痛的影響?？瞻捉M每天生理鹽水灌胃1次，給藥組每天灌胃給藥1次，連續(xù)灌胃10天。于末次給藥后1小時(shí)，按0.1ml/10g的劑量給每只小鼠腹腔注射0.6％冰醋酸溶液。記錄15min內(nèi)每只小鼠扭體反應(yīng)的次數(shù)及首次出現(xiàn)時(shí)間。

6、　　 3.二十五味珊瑚丸對(duì)偏頭痛大鼠血漿中NO、NOS、Mg2+和ET的影響
　　 SPF級(jí)SD大鼠54只，雌雄各半，隨機(jī)等分為9組，各組分別為空白組，模型組，二十五味珊瑚丸低劑量組、中劑量組、高劑量組，正天丸組，鹽酸氟桂利嗪膠囊組，二十五味珊瑚丸加正天丸組和二十五味珊瑚丸加鹽酸氟桂利嗪膠囊組?？瞻捉M和模型組每天生理鹽水灌胃1次，給藥組每天灌胃給藥1次，連續(xù)灌胃10天。于末次灌胃后0.5小時(shí)，空白組皮下注射等量生理鹽水，其余各

7、組按10mg/kg的劑量皮下注射硝酸甘油注射液復(fù)制偏頭痛大鼠模型，觀察大鼠的外觀行為變化。于末次灌胃后4小時(shí)，各組大鼠腹腔注射10％水合氯醛溶液麻醉，用真空采血管采集腹主動(dòng)脈血，混勻，離心，分離血漿，保存于冰箱中備用。采用硝酸還原酶法檢測(cè)血漿中的NO和NOS，分光光度法檢測(cè)血漿中的Mg2+，酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)血漿中的ET。
　　 4.二十五味珊瑚丸對(duì)偏頭痛大鼠中腦和下丘腦中c-Fos蛋白的影響
　　 SPF級(jí)SD大鼠54

8、只，雌雄各半，隨機(jī)等分為9組，分組情況同二十五味珊瑚丸對(duì)偏頭痛大鼠血漿中NO、NOS、Mg2+和ET的影響?？瞻捉M和模型組每天生理鹽水灌胃1次，給藥組每天灌胃給藥1次，連續(xù)灌胃10天。于末次灌胃后0.5小時(shí)，空白組皮下注射等量生理鹽水，其余各組按10mg/kg的劑量皮下注射硝酸甘油注射液復(fù)制偏頭痛大鼠模型，觀察大鼠的外觀行為變化。于末次灌胃后4小時(shí)，各組大鼠腹腔注射10％水合氯醛溶液麻醉。使用含4％多聚甲醛的PBS將大鼠經(jīng)心臟灌注固定，

9、完整取出大鼠腦組織，投入含4％多聚甲醛的PBS繼續(xù)固定24～48h，然后取出大鼠中腦及下丘腦組織，做4μm石蠟切片，保存?zhèn)溆?。采用HE染色觀察組織結(jié)構(gòu)是否被破壞，采用免疫組化法檢測(cè)中腦和下丘腦中的c-Fos蛋白。
　　 5.統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
　　 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件分析，檢驗(yàn)結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（(x)±s）表示。各組數(shù)據(jù)間的兩兩比較采用單因素方差分析，如果方差齊性，則采用LSD檢驗(yàn)，如果方差不齊，則采用Dun

10、nett T3檢驗(yàn)，檢驗(yàn)的顯著性水準(zhǔn)取P=0.05，當(dāng)P＜0.05時(shí)，檢驗(yàn)結(jié)果具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 研究結(jié)果:
　　 1.二十五味珊瑚丸對(duì)小鼠中樞性疼痛的影響
　　 各給藥組給藥后1小時(shí)和2小時(shí)小鼠首次舔后足或跳躍時(shí)間與空白組比較，除二十五味珊瑚丸低劑量組外，其余各組均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05或P＜0.01）;各給藥組給藥后1小時(shí)和2小時(shí)小鼠首次舔后足或跳躍時(shí)間與二十五味珊瑚丸中劑量組比較，二十五味珊瑚丸高劑

11、量組和二十五味珊瑚丸加正天丸組均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，而正天丸組、鹽酸氟桂利嗪膠囊組和二十五味珊瑚丸加鹽酸氟桂利嗪膠囊組則均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);二十五味珊瑚丸低劑量組給藥后1小時(shí)小鼠首次舔后足或跳躍時(shí)間與二十五味珊瑚丸中劑量組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，而給藥后2小時(shí)則有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 2.二十五味珊瑚丸對(duì)小鼠外周性疼痛的影響
　　 各給藥組小鼠15min內(nèi)扭體次數(shù)和15min

12、內(nèi)首次出現(xiàn)扭體時(shí)間與空白組比較，除二十五味珊瑚丸低劑量組外，其余各組均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05或P＜0.01);各給藥組小鼠15min內(nèi)扭體次數(shù)和15min內(nèi)首次出現(xiàn)扭體時(shí)間與二十五味珊瑚丸中劑量組比較，二十五味珊瑚丸高劑量組和二十五味珊瑚丸加正天丸組均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05或P＜0.01），正天丸組和鹽酸氟桂利嗪膠囊組均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);二十五味珊瑚丸低劑量組小鼠15min內(nèi)扭體次數(shù)與二十五味珊瑚丸中劑量組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)

13、學(xué)意義(P＞0.05)，而15min內(nèi)首次出現(xiàn)扭體時(shí)間則有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);二十五味珊瑚丸加鹽酸氟桂利嗪膠囊組小鼠15min內(nèi)扭體次數(shù)與二十五味珊瑚丸中劑量組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，而15min內(nèi)首次出現(xiàn)扭體時(shí)間則無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　 3.二十五味珊瑚丸對(duì)偏頭痛大鼠血漿中NO、NOS、Mg2+和ET的影響
　　 各組大鼠在項(xiàng)部皮下注射生理鹽水或硝酸甘油注射液后，空白組未見(jiàn)耳紅，偶有撓頭

14、和扒籠現(xiàn)象;其余各組微見(jiàn)耳紅，撓頭和扒籠現(xiàn)象增加，尤以模型組顯著，此現(xiàn)象持續(xù)約1.5-3小時(shí)，繼而出現(xiàn)倦怠、蜷臥、活動(dòng)減少現(xiàn)象。
　　 各組大鼠血漿中NO、NOS、Mg2+和ET的水平與模型組比較，除二十五味珊瑚丸低劑量組外，其余各組均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05或P＜0.01）;各給藥組大鼠血漿中NO、NOS、Mg2+和ET的水平與二十五味珊瑚丸中劑量組比較，二十五味珊瑚丸加正天丸組均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05或P＜0.01），

15、二十五味珊瑚丸低劑量組、正天丸組和鹽酸氟桂利嗪膠囊組均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);二十五味珊瑚丸高劑量組大鼠血漿中NO和ET的水平與二十五味珊瑚丸中劑量組比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05或P＜0.01），而NOS和Mg2+的水平則均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);二十五味珊瑚丸加鹽酸氟桂利嗪膠囊組大鼠血漿中NO、NOS和Mg2+的水平與二十五味珊瑚丸中劑量組比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，而ET的水平無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。<

16、br>　　 4.二十五味珊瑚丸對(duì)偏頭痛大鼠中腦和下丘腦中c-Fos蛋白的影響
　　 偏頭痛大鼠外觀行為的變化同二十五味珊瑚丸對(duì)偏頭痛大鼠血漿中NO、NOS、Mg2+和ET的影響。
　　 各組大鼠中腦和下丘腦中陽(yáng)性細(xì)胞總數(shù)目和總面積及下丘腦中陽(yáng)性細(xì)胞積分光密度與模型組比較，除二十五味珊瑚丸低劑量組外，其余各組均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05或P＜0.01）;各組大鼠中腦中陽(yáng)性細(xì)胞積分光密度與模型組比較，除二十五味珊瑚丸低劑量

17、組和鹽酸氟桂利嗪膠囊組外，其余各組均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05或P＜0.01）;各給藥組大鼠中腦中陽(yáng)性細(xì)胞總數(shù)目、總面積和積分光密度與二十五味珊瑚丸中劑量組比較，二十五味珊瑚丸加正天丸組和二十五味珊瑚丸加鹽酸氟桂利嗪膠囊組均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05或P＜0.01），二十五味珊瑚丸低劑量組、二十五味珊瑚丸高劑量組、正天丸組和鹽酸氟桂利嗪膠囊組均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);各給藥組大鼠下丘腦中陽(yáng)性細(xì)胞總數(shù)目、總面積和積分光密度與二十五味

18、珊瑚丸中劑量組比較，二十五味珊瑚丸加正天丸組和二十五味珊瑚丸加鹽酸氟桂利嗪膠囊組均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05或P＜0.01)，二十五味珊瑚丸低劑量組、正天丸組和鹽酸氟桂利嗪膠囊組均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);二十五味珊瑚丸高劑量組大鼠下丘腦中陽(yáng)性細(xì)胞總數(shù)目和總面積與二十五味珊瑚丸中劑量組比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，而積分光密度則無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　 研究結(jié)論:
　　 1.二十五味珊瑚丸對(duì)小鼠中樞

19、和外周性疼痛具有鎮(zhèn)痛作用，能夠降低偏頭痛大鼠血漿中NO、NOS和ET的水平，升高M(jìn)g2+的水平，能夠降低偏頭痛大鼠中腦和下丘腦中c-Fos蛋白的表達(dá)，但是量效關(guān)系不明顯。
　　 2.二十五味珊瑚丸、正天丸和鹽酸氟桂利嗪對(duì)小鼠的中樞和外周性鎮(zhèn)痛作用及偏頭痛大鼠血漿中NO、NOS、Mg2+和ET及中腦和下丘腦中c-Fos蛋白的影響沒(méi)有顯著差異。
　　 3.二十五味珊瑚丸聯(lián)合正天丸對(duì)小鼠的中樞和外周性鎮(zhèn)痛作用及偏頭痛大鼠血漿中