二十五味珊瑚丸的毒理學(xué)及主要指標(biāo)成分的含量分析方法初探.pdf

1、研究背景：二十五味珊瑚丸是傳統(tǒng)藏藥,在公元18世紀(jì)由藏醫(yī)學(xué)創(chuàng)使人宇拓.元丹貢布創(chuàng)制,收載于藏醫(yī)著名經(jīng)典著作《四部醫(yī)典》,至今已有一千二百多年的臨床應(yīng)用歷史,是藏醫(yī)名貴珍寶藥品,1997年被國(guó)家衛(wèi)生部批準(zhǔn)為國(guó)家中藥保護(hù)品種,目前《中國(guó)藥典》(2015版)收載。二十五味珊瑚丸具有清熱定驚、開(kāi)竅通絡(luò)、止痛等功效,用于治療“白脈病”,癥見(jiàn)神志不清,身體麻木,頭暈?zāi)肯?腦部疼痛,血壓不調(diào),頭痛、癲癇及各種神經(jīng)性疼痛,現(xiàn)代臨床上主要用于腦血管和腦神

2、經(jīng)疾病,如癲癇[1]、腦中風(fēng)[2]、偏頭痛[3]等。該處方雖然已有上千年的歷史，但是，到目前為止，對(duì)藏藥二十五味珊瑚丸只有西紅花、紅花主要成分的薄層色譜鑒別以及烏頭堿、硫化汞、馬兜鈴酸A的含量測(cè)定，對(duì)于毒理學(xué)研究和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究所涉及的相關(guān)論文較少，為了完善其相關(guān)的質(zhì)量評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)以及安全性評(píng)價(jià)提供一定的依據(jù)。
　　研究目的：對(duì)經(jīng)典藏藥二十五味珊瑚丸進(jìn)行急性、亞急性毒性反應(yīng)的初步研究，檢測(cè)其藥物的安全性；測(cè)定二十五味珊瑚丸中的主要指標(biāo)成

3、分羥基紅花黃花素A、馬兜鈴酸A、重金屬及硫化汞的含量，形成比較規(guī)范的安全性評(píng)價(jià)模式，為藏藥二十五味珊瑚丸的質(zhì)量評(píng)價(jià)提供一個(gè)參考，也為臨床安全合理的用藥提供一定的依據(jù)。
　　研究方法：1.急性毒性實(shí)驗(yàn)：按最大耐受量（MTD）測(cè)定法，分別采用昆明種小鼠和SD大鼠各20只，雌雄各半，灌胃給藥37.25％二十五味珊瑚丸CMC混懸液，一日三次（總?cè)萘繛?20ml/Kg），總劑量為44.70g/Kg（相當(dāng)于原生藥44.70g，為臨床成人擬推薦

4、用藥劑量（1g/d）的2682倍。）。2.亞急性毒性實(shí)驗(yàn)：實(shí)驗(yàn)采用SD大鼠80只，雌雄各半，區(qū)分性別、隨機(jī)分為對(duì)照組及二十五味珊瑚丸0.1852g/kg、0.3704g/kg和0.7408g/kg劑量組（分別為成人臨床使用量的25倍，50倍，100倍），連續(xù)給藥30天，停藥24小時(shí)后分別取樣進(jìn)行血液學(xué)、血液生化學(xué)及病理組織學(xué)檢查。3.采用《中國(guó)藥典》2010版一部附錄重金屬檢查法和硫氰酸銨滴定法分別測(cè)定重金屬總量和硫化汞的含量；采用一般

5、鑒別試驗(yàn)對(duì)可溶性汞鹽進(jìn)行了檢查。4.采用HPLC法測(cè)定馬兜鈴酸的含量,色譜柱：Kromasil C18（4.6×200mm）；流動(dòng)相：甲醇-0.05%冰醋酸（62：38）；檢測(cè)波長(zhǎng)：250nm；柱溫：30℃；流速：1mL/min。5.采用色譜條件為Agilent Polaris NH2柱(250mm×4.6 mm，5μm)；甲醇26%-乙腈2%-磷酸水72%(PH=2.5)作為流動(dòng)相；流速1.0 m L/min；柱溫25℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：4

6、03nm;進(jìn)樣體積：10μL進(jìn)行檢測(cè)，精密制備對(duì)照品和供試品溶液，并通過(guò)線性關(guān)系考察、精密度、穩(wěn)定性和重復(fù)性實(shí)驗(yàn)以及加樣回收率試驗(yàn)后進(jìn)行樣品檢測(cè)并得出結(jié)果。
　　研究結(jié)果：1.急性毒性試驗(yàn)：小鼠、大鼠分別灌胃二十五味珊瑚丸44.7g/kg，相當(dāng)于臨床用藥量的2682倍，動(dòng)物未見(jiàn)嚴(yán)重毒性反應(yīng)，亦無(wú)動(dòng)物死亡。實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示，二十五味珊瑚丸無(wú)明顯急性毒性反應(yīng)，二十五味珊瑚丸給小鼠、大鼠灌服的最大耐受量均為44.7g/kg。2.亞急性毒性實(shí)

7、驗(yàn)：二十五味珊瑚丸30天連續(xù)給藥對(duì)大鼠免疫功能及肝、腎、肺組織均有不同程度的影響和損害，可引起毒性反應(yīng)，呈現(xiàn)出一定的劑量依賴(lài)性，主要毒性靶器官為肝、腎、肺，提示二十五味珊瑚丸不宜長(zhǎng)期大量服用。3.二十五味珊瑚丸中重金屬總量達(dá)200～225ppm；硫化汞平均回收率為99.64%，RSD=1.64％(n=6)，含量為29.75mg/g；未顯汞鹽的鑒別反應(yīng)。4.二十五味珊瑚丸中未檢出馬兜鈴酸A。5.測(cè)定出二十五味珊瑚丸中羥基紅花黃色素A含量范