新型納米材料HPD作為基因載體的研究.pdf

1、目的：研究新型納米載體HPC-g-PDMAEMA（HPD）對(duì)于不同腫瘤細(xì)胞系的轉(zhuǎn)染能力，初步探索HPD對(duì)于siRNA的運(yùn)載能力以及HPD運(yùn)載wt-p53對(duì)腫瘤生長(zhǎng)的抑制效果，評(píng)價(jià)其在基因治療及研究中的作用。
　　 方法：凝膠電泳分析HPD與pDNA的結(jié)合能力；HPD和Lipo2K運(yùn)載綠色熒光蛋白（GFP）質(zhì)粒，分別轉(zhuǎn)染MCF7、973、JF305三種腫瘤細(xì)胞系，采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)其轉(zhuǎn)染效率；MTS檢測(cè)HPD載體的細(xì)胞毒性；HPD

2、和Lipo2K運(yùn)載針對(duì)GADPH的siRNA，轉(zhuǎn)染MCF7，利用RT-PCR檢測(cè)其RNA轉(zhuǎn)染效率；構(gòu)建pEGFP-C1-p53重組質(zhì)粒，HPD和Lipo2K分別攜帶該質(zhì)粒轉(zhuǎn)染MCF7細(xì)胞，利用MTS方法評(píng)價(jià)其對(duì)于腫瘤細(xì)胞增殖的抑制作用，流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞周期。
　　 結(jié)果：
　　 1.當(dāng)N/P比值大于等于10時(shí)，HPD與pDNA具有較好的結(jié)合能力。
　　 2.當(dāng)N/P比值為12時(shí)，HPD和pEGFP-C1質(zhì)粒復(fù)合

3、物轉(zhuǎn)染MCF7、973和JF305的效率分別為32.4％、28.3％和15.1％，高于其他N/P值時(shí)的轉(zhuǎn)染效率。在乳腺癌細(xì)胞MCF7中，HPD載體的轉(zhuǎn)染效率高于Lipo2K；對(duì)肺腺癌細(xì)胞973，二者轉(zhuǎn)染效率相近；對(duì)胰腺癌細(xì)胞JF305，Lipo2K的轉(zhuǎn)染效率高于HPD。
　　 3.當(dāng)N/P比值為12時(shí)，MCF7、973、JF305三種細(xì)胞的相對(duì)增殖率分別為86.8％、89.2％、89.7％，毒性級(jí)別為1級(jí)，載體對(duì)細(xì)胞無(wú)毒性。

4、r>　　 4.在MCF7細(xì)胞中，利用HPD進(jìn)行RNA轉(zhuǎn)染，效率低于Lipo2K。
　　 5.成功構(gòu)建了pEGFP-C1-p53重組質(zhì)粒，western blot鑒定有外源性p53的表達(dá)。
　　 6.HPD/pEGFP-C1-p53復(fù)合物對(duì)于MCF7細(xì)胞增殖的抑制作用高于Lipo2K/pEGFP-C1-p53組，p53能夠通過(guò)細(xì)胞周期阻滯抑制MCF7的增殖。
　　 結(jié)論：HPD作為新型納米載體，細(xì)胞毒性較低。對(duì)于