靜脈注入膽紅素對新生大鼠脾IRAK-4及p-JNK蛋白表達的影響.pdf

1、目的:建立新生大鼠高膽紅素血癥模型,探討靜脈注入膽紅素對脾白細胞介素1受體相關(guān)激酶-4(interleukin-1receptorassociatedkinase-4,IRAK-4)及磷酸化c-Jun氨基端激酶(phospho-c-JunN-terminalkinase,p-JNK)蛋白表達的影響。
　　方法:⒈實驗分組:將144只7～8d新生SD大鼠,隨機分為空白對照組(Ⅰ)、脂多糖對照組(Ⅱ)、15mg/kg膽紅素對照組(Ⅲ)

2、、15mg/kg膽紅素+脂多糖組(Ⅳa)、30mg/kg膽紅素+脂多糖組(Ⅳb)和50mg/kg膽紅素+脂多糖組(Ⅳc),共6組,每組24只,各組又分為2h、5h、24h3個時間點,每個時間點8只。⒉建立新生大鼠高膽紅素血癥模型:⑴乙醚麻醉新生SD大鼠,分別經(jīng)頸靜脈注入不同劑量膽紅素(15mg/kg、30mg/kg和50mg/kg);空白對照組和脂多糖對照組給予生理鹽水0.1ml頸靜脈注入。⑵在頸靜脈注入1h后,空白對照組和15mg/k

3、g膽紅素對照組腹腔注入0.05ml生理鹽水;其余各組腹腔注入1mg/kg脂多糖。⑶分別于頸靜脈注入后2h、5h、24h采血,測血漿膽紅素濃度。⑷采血后取脾臟,制成石蠟切片,采用免疫組織化學方法檢測脾IRAK-4和p-JNK蛋白的表達。
　　結(jié)果:⒈新生SD大鼠在注入膽紅素后不同時間,皮膚出現(xiàn)不同程度的黃染,30～40分鐘黃染達高峰,1h后皮膚黃染逐漸消退。在膽紅素注入1h時,15mg/kg、30mg/kg和50mg/kg膽紅素組血

4、漿總膽紅素濃度95％的置信區(qū)間分別為:(106.31,123.49)μmol/L、(196.58,238.90)μmol/L和(325.15,349.07)μmol/L,膽紅素注入劑量與血漿總膽紅素濃度呈正相關(guān)(rs=0.9452,P<0.01)。以上3個血漿總膽紅素濃度范圍分別定為本模型的低、中、高膽紅素濃度范圍。2.脂多糖單獨作用可促進脾IRAK-4和p-JNK的表達(P<0.01),在脂多糖注入后1h時即可觀察到這種促進作用,4h

5、時作用最強,24h時對IRAK-4的促進作用明顯減弱,對p-JNK的促進作用消失。3.低濃度膽紅素單獨作用可抑制脾IRAK-4和p-JNK的表達(P<0.01)。對IRAK-4的抑制作用,在膽紅素注入后2h時即可觀察到,5h時作用最強,24h時作用消失;對p-JNK的抑制作用,在膽紅素注入后2h時已較強,以后逐漸減弱,24h時仍存在。4.低、中、高濃度膽紅素對脂多糖刺激脾IRAK-4表達有抑制作用(P<0.01),膽紅素注入后2h時即可

6、觀察到這種抑制作用,5h時作用明顯,24h時低、中濃度膽紅素的抑制作用消失,高濃度膽紅素的抑制作用仍然存在(P<0.01)。5.中、高濃度膽紅素對脂多糖刺激p-JNK表達有促進作用(P<0.01),膽紅素注入后2h時即可觀察到這種促進作用,5h時作用最強,24h時作用減弱;低濃度膽紅素對脂多糖刺激p-JNK表達有抑制作用(P<0.01),膽紅素注入后2h時即可觀察到這種抑制作用,以后逐漸減弱,5h時抑制作用消失。6.在脂多糖刺激下,IR

7、AK-4和p-JNK的表達與膽紅素血漿濃度的相關(guān)分析結(jié)果:⑴2h、5h和24h的IRAK-4IOD(SUM)值與膽紅素濃度呈負相關(guān)(r分別為:-0.838、-0.845和-0.580,P<0.01)。⑵2h、5h和24h的p-JNKIOD(SUM)值與膽紅素濃度呈正相關(guān)(r分別為0.897、0.935,P<0.01和0.466,P<0.05)。7.在膽紅素與脂多糖作用下,IRAK-4和p-JNK間的相關(guān)分析結(jié)果:⑴2h、5h時IRAK-

8、4與p-JNKIOD(SUM)值呈負相關(guān)(r分別為-0.846和-0.946,P<0.01)。⑵24h時IRAK-4與p-JNKIOD(SUM)值無相關(guān)(r為-0.384,P=0.064)。
　　結(jié)論:1.LPS單獨作用能夠促進IRAK-4和p-JNK的表達。2.低濃度膽紅素單獨作用能夠抑制IRAK-4和p-JNK的表達。3.低、中、高濃度膽紅素對LPS刺激IRAK-4表達有抑制作用,這種抑制作用呈濃度依賴性,隨著膽紅素濃度的升高