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文檔簡介
1、目的:研究大鼠全腦缺血再灌注損傷后海馬CA1區(qū)P-JNK、C-JUN蛋白的表達與該區(qū)缺血性神經元凋亡的關系及亞低溫對缺血性神經元凋亡和P-JNK、C-JNK蛋白表達的影響,探討亞低溫對腦缺血再灌注損傷可能的保護機制。 方法:采用四血管阻斷法建立大鼠全腦缺血模型。雄性成年SD大鼠144只,隨機分為假手術組(SH組,n=48)、常溫組(IR組,n=48)和亞低溫組(HIR組,n=48)。SH組:暴露枕后三角和分離雙側頸總動脈,不電凝
2、椎動脈和夾閉血管,維持正常體溫(36.5-37.5℃)。IR、HIR.組:電凝阻斷兩側椎動脈(VA)血流,無創(chuàng)動脈夾夾閉雙側頸總動脈阻斷血流15 min松開動脈夾恢復腦血流灌注,HR組再灌注時維持正常體溫(36.5-37.5℃),HIR組再灌注即刻降溫,8至10 min之內使腦溫降至32.5-33.5℃,維持此溫度3h。各組設缺血再灌注后6h、12h、1d、3d 4個時間點,各組每一時間點各12只(n=12),其中6只行蘇木素-伊紅(H
3、E)染色觀察各時間點海馬CA1區(qū)細胞形態(tài)學變化和TUNEL法檢測海馬CA1區(qū)神經元凋亡,6只免疫印跡檢測P-JNK、C-JUN蛋白表達。 結果: 1.HE染色結果:IR組和HIR組于全腦缺血再灌注后6h,HE染色未見明顯改變,IR組缺血再灌注1d時CA1區(qū)出現嚴重改變,3d時損傷最嚴重,出現細胞數目減少,細胞胞體縮小、胞核固縮深染,損傷嚴重,排列紊亂核膜不清,核仁消失。而HIR組海馬存活的錐體細胞數較之常溫組12h、1d
4、、3d時間點均明顯增加。 2.TUNEL標記 IR組于缺血再灌注后6h在海馬CA1區(qū)陽性細胞開始增多,缺血再灌注1d時陽性細胞數最多。而HIR組6h、12h、1d時間點陽性細胞數均較常溫組少,且凋亡高峰延遲至第3d。 3.免疫印跡結果IR組于缺血再灌注6h后P-JNK出現免疫反應增強,隨著再灌注時間的延長,逐漸升高,于3d時達到高峰;HIR組較假手術組比,各個時間點表達均明顯降低。全腦缺血再灌注后6hC-JUN蛋白在IR
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