磷酸肌酸對腦缺血再灌注損傷大鼠海馬c-fos基因表達的影響.pdf

1、目的：建立腦缺血再灌注損傷模型，觀察磷酸肌酸對腦細胞損傷的保護效果，通過對大鼠海馬組織即刻基因c-fosmRNA基因表達的檢測，探討損傷時磷酸肌酸對腦的保護作用和機制。
　　方法：本實驗選用體重在300-350g之間的27只健康成年雄性 Sprague-Dawley（SD）大鼠作為研究對象，隨機分組:1、假手術(shù)組(Sham組，n=9)：麻醉（10％水合氯醛，350mg·kg-1腹腔注射)后頸部正中切口，分離出兩側(cè)頸總動脈但不夾閉，

2、暴露30min；2、缺血再灌注組(I/R組，n=9)：麻醉后分離并夾閉雙側(cè)頸總動脈30min，松開動脈夾后再灌注24h；3、藥物處理組(Drug組，n=9)：麻醉后分離并夾閉雙側(cè)頸總動脈30min時松開動脈夾，同時從尾靜脈緩慢注射磷酸肌酸（PCr，80mg·100g-1)，再灌注24h。術(shù)后三組大鼠均放籠飼養(yǎng)24h后直接斷頭，在冰屑上迅速開顱取海馬組織，左側(cè)海馬進行液氮速凍后放入-80℃冰箱保存以備采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（RT-PCR

3、)對c-fos mRNA的檢測，右側(cè)海馬放入4%的甲醛保存以備免疫組織化學(xué)法進行檢測。
　　結(jié)果：兩只大鼠因呼吸衰竭死亡，其余均度過觀察期。Durg組的大鼠比 Sham組大鼠精神狀態(tài)佳，活力強。1、HE染色法結(jié)果比較：Sham組的神經(jīng)細胞排列緊密、規(guī)則，形態(tài)結(jié)構(gòu)基本正常；與Sham組相比，I/R組的神經(jīng)元細胞排列散亂，細胞結(jié)構(gòu)破壞，核碎裂、核固縮；與I/R組相比，Drug組大部分神經(jīng)元細胞結(jié)構(gòu)完整，排列有序；2、免疫組化染色觀察c

4、-fos基因表達結(jié)果比較：c-fos mRNA呈棕黃色的免疫陽性細胞在Sham組海馬組織僅有少量表達，染色淺；I/R組大鼠海馬組織中染色較深，且表達水平高；Drug組大鼠海馬組織c-fos mRNA在細胞核內(nèi)有所表達，與I/R組相比，染色減輕。3、RT-PCR技術(shù)檢測結(jié)果比較：電泳圖中三組β-actin電泳條帶寬度和亮度無明顯差別，I/R組的c-fos電泳條帶寬厚、明亮；Sham組的c-fos mRNA條帶模糊、暗淡；Drug組條帶亮度