常溫體外循環(huán)對(duì)大鼠海馬c-fos基因表達(dá)的影響.pdf

1、目的:通過建立大鼠體外循環(huán)模型（CPB），觀察常溫體外循環(huán)對(duì)大鼠海馬神經(jīng)元即早基因c-fos基因表達(dá)的影響。
　　方法：成年雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠12只，隨機(jī)分為假手術(shù)組（Sham組， n=6），體外循環(huán)組（CPB組，n=6）。兩組動(dòng)物麻醉（10％水合氯醛，350 mg·kg-1腹腔注射）后經(jīng)口氣管插管并行機(jī)械通氣，經(jīng)右側(cè)上腔靜脈置入右心房插管及經(jīng)右側(cè)頸內(nèi)動(dòng)脈置入動(dòng)脈灌注管，肝素抗凝（500U·kg-1）。C

2、PB組采用常溫（36℃以上），經(jīng)右側(cè)上腔靜脈右心房引流，右頸內(nèi)動(dòng)脈灌注，灌注流量為（120～150） mL·kg-1·min-1，總轉(zhuǎn)流時(shí)間60min；Sham組除了不經(jīng)歷CPB外，其余操作與CPB組相同；實(shí)驗(yàn)過程中檢測(cè)體溫、動(dòng)脈壓、動(dòng)脈血?dú)?、電解質(zhì)和血液稀釋度。CPB組于停機(jī)后1h、Sham組于手術(shù)后2h處死動(dòng)物，立即斷頭取腦分離海馬組織，左側(cè)海馬放入液氮速凍后轉(zhuǎn)入-80℃冰箱保存以供c-fos mRNA檢測(cè)，右側(cè)海馬放入4%多聚甲醛

3、保存以供免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)。c-fos檢測(cè)采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（RT-PCR）的方法。
　　結(jié)果：1.兩組動(dòng)物生理指標(biāo)和實(shí)驗(yàn)經(jīng)過：12只大鼠均安全度過外科實(shí)驗(yàn)動(dòng)物過程。各個(gè)時(shí)間點(diǎn)的兩組大鼠的體重、及血?dú)夥治鲋笜?biāo)無(wú)明顯變化（P>0.05），CPB轉(zhuǎn)流中及停機(jī)后K+、Ca2+、HCT、THbc等指標(biāo)變化較明顯（P<0.05），表現(xiàn)為K+、Ca2+、HCT、THbc降低。2.海馬HE染色觀察Sham組神經(jīng)細(xì)胞數(shù)量及形態(tài)結(jié)構(gòu)分布正常

4、，椎體細(xì)胞呈橢圓形，核仁清楚，未見明顯病理學(xué)改變；CPB組可見神經(jīng)元腫脹，出現(xiàn)核固縮和（或）核碎裂的萎縮神經(jīng)元。3.Sham組海馬 c-fos僅有少量表達(dá)，陽(yáng)性細(xì)胞染色較淺；CPB組大鼠海馬c-fos呈高水平表達(dá)，染色深，神經(jīng)元結(jié)構(gòu)清晰，完整，陽(yáng)性物質(zhì)均位于胞核內(nèi)。4.CPB組的c-fos電泳條帶變焦明亮清晰，Sham組的c-fos條帶卻模糊、暗淡CPB組的c-fos/β-action比值大于Sham組（P<0.05），表明CPB組海馬