不同強度光照對母雞離頂蓋通路c-fos基因表達的影響.pdf

1、為探究光照對母雞生產(chǎn)性能影響的神經(jīng)調(diào)節(jié)機制,為科學利用光照促進養(yǎng)雞業(yè)進一步發(fā)展提供理論基礎,本研究采用HRP逆行標記以及免疫組織化學法細胞核FOS核蛋白的檢測技術相結合的方法,對母雞離頂蓋通路對不同強度光照刺激的反應進行了研究。禽類是最依賴視覺系統(tǒng)的脊椎動物,禽類離頂蓋通路是其主要的2個平行視覺信息加工通路之一,包括視網(wǎng)膜、視頂蓋、圓核和外紋體等。實驗采用120日齡母雞,右眼遮光5 d后引入HRP,48 h后進行不同強度的光照刺激1～1

2、.5 h,暗適應1.5h后灌流固定,取腦制作連續(xù)冰凍切片,根據(jù)HRP逆行標記神經(jīng)元,免疫組化方法檢測c-fos基因在丘腦圓核、間腦視頂蓋和SP／IPS核的表達水平、出現(xiàn)方式、部位和數(shù)量分析推斷母雞離頂蓋視覺通路對不同強度光信息的傳導通路和功能活動區(qū)域,以及對母雞離頂蓋視覺通路c-fos基因表達的影響,并且為進一步探究打下基礎。
　　 本研究表明：HRP逆行標記神經(jīng)細胞呈圓形、橢圓形或多角形,其陽性細胞主要分布在雞腦左側(cè)視頂蓋SG

3、C層和項蓋前下核／項蓋前間下核(SP／IPS核)。當HRP注射位點位于ROT核吻側(cè)部時,SGC層淺層、SP／IPS核內(nèi)側(cè)部陽性細胞聚集；注射位點于ROT核背尾側(cè)部時,SGC淺層、SP／IPS核外側(cè)部陽性細胞聚集；注射位點于ROT核中央部時,SGC層中間層以及SP／IPS核外側(cè)部陽性細胞較多,注射位點于ROT核腹尾側(cè)部時,SGC層深層及SP／IPS核外側(cè)部陽性細胞較多。免疫組化方法檢測到試驗組中母雞間腦和中腦內(nèi)有大量Fos樣免疫反應陽性神

4、經(jīng)元且Fos樣免疫反應陽性細胞核及核膜呈棕黃色或棕黃色顆粒沉積,胞質(zhì)、軸突、樹突未見顯色,胞核胞質(zhì)分界明顯,各核團神經(jīng)元胞體主要為三角形、卵圓形、紡錘形和梨形,主要分布在雞腦左側(cè),包括視頂蓋中央灰質(zhì)層(SGC),圓核(ROT),SP／IPS核,試驗組顯著表達,對照組少見或未見陽性神經(jīng)元散在分布,陰性對照切片未見Fos樣免疫反應陽性物質(zhì)。通過結合分析HRP逆行標記細胞以及Fos樣免疫反應陽性神經(jīng)元分布的區(qū)域、密度、重疊性,探討不同強度光照

5、對母雞離頂蓋視覺通路c-fos基因表達的影響,發(fā)現(xiàn)不同強度光照誘導的母雞離項蓋視覺通路c-fos基因表達水平不同,其中30 lx組SGC層、ROT核表達水平較高,40 lx組略有下降,20 lx組、10 lx組次之,在40 lx組SP／IPS核表達水平較高,30lx組、20lx組、10lx組次之。對SGC層、SP／IPS核、ROT核不同部位100μm×100μm面積內(nèi)受不同光刺激誘導的Fos樣免疫反應陽性神經(jīng)元光密度值進行t檢驗,得出在

6、10 lx與20 lx,20 lx與30 lx,30 lx與40 lx,10 lx與30 lx,10 lx與40 lx,20 lx與40 lx之間差異顯著(P<0.05),反映了各核團Fos樣免疫反應陽性神經(jīng)元表達與不同強度的光刺激有關,并且在SGC層的不同深度,對光刺激的敏感性不同,其中以SGC層深層對光刺激敏感性最弱,并在光照強度為30lx時達到c-fos基因表達的高峰,經(jīng)HRP逆行追蹤顯示,SGC深層視神經(jīng)元可經(jīng)兩條路徑分布投射至

7、ROT核,一為直接投射至ROT核腹尾側(cè)部,一為經(jīng)SP／IPS核投射至ROT核。SGC深層視神經(jīng)元所投射至的ROT核腹尾側(cè)部,對光刺激敏感性較ROT吻側(cè)部、中央部、背尾側(cè)部低,并且ROT核在30 lx達到c-fos基因表達的高峰。SP／IPS核可分為內(nèi)側(cè)和外側(cè),分別在光刺激強度為40 lx時c-fos基因表達產(chǎn)物最多,但內(nèi)側(cè)較外側(cè)表達明顯,SP／IPS-圓核投射是具有部位對應的局部地域有序投射。綜合分析光照刺激誘導母雞離頂蓋視覺通路c-f