原癌基因c-fos的生物節(jié)律研究.pdf

1、研究原癌基因c-fos在正常小鼠大腦顳葉皮質(zhì)、海馬和體外培養(yǎng)小鼠NIH3T3成纖維細(xì)胞中的生物節(jié)律變化，并闡述其與嗎啡成癮的關(guān)系。方法：飼養(yǎng)正常小鼠，按時(shí)間點(diǎn)(間隔4小時(shí))灌注固定小鼠，取全腦作冰凍切片，用原位雜交法測(cè)定小鼠顳葉皮質(zhì)和海馬c-fosmRNA的變化。體外培養(yǎng)小鼠NIH3T3成纖維細(xì)胞，血清休克誘導(dǎo)基因節(jié)律表達(dá)，按時(shí)間點(diǎn)提取細(xì)胞總RNA，用RT-PCR方法半定量檢測(cè)c-fosmRNA和per1mRNA的節(jié)律變化。制備嗎啡成癮

2、小鼠模型，一組按時(shí)間點(diǎn)(間隔4小時(shí))灌注固定小鼠，取全腦作冰凍切片，用原位雜交法測(cè)定小鼠顳葉皮質(zhì)和海馬c-fosmRNA的變化；另一組按時(shí)間點(diǎn)注射鹽酸納絡(luò)酮催癮，連續(xù)觀察30min戒斷體征指標(biāo)(跳躍、濕狗樣抖動(dòng)、爪顫、齒顫)出現(xiàn)次數(shù)?！　≈苽鋯岱瘸砂a小鼠模型，向小鼠腦室內(nèi)注射脂質(zhì)體包裹的重組質(zhì)粒pcDNA3.1-per1RZDNA，使之轉(zhuǎn)錄出可以阻斷小鼠腦內(nèi)生物節(jié)律基因per1表達(dá)的特異性核酶。灌注固定小鼠，取全腦作冰凍切片，用原位雜

3、交和免疫組化法測(cè)定小鼠海馬c-fos轉(zhuǎn)錄及表達(dá)的變化。 結(jié)論：正常小鼠顳葉皮質(zhì)和海馬神經(jīng)活動(dòng)可能呈近日節(jié)律變化，慢性給予嗎啡能夠使這些部位的神經(jīng)活動(dòng)發(fā)生變化。雖然仍保持近日節(jié)律，但中值、幅度和相位改變，說(shuō)明嗎啡成癮一方面與近日節(jié)律參與有關(guān)，另一方面會(huì)影響近日節(jié)律有關(guān)基因自激振蕩過(guò)程，使近日節(jié)律的參數(shù)發(fā)生改變。重組質(zhì)粒表達(dá)的特異性核酶可以阻斷生物節(jié)律基因per1的表達(dá)，并抑制海馬c-fos基因的轉(zhuǎn)錄和表達(dá)，從而控制嗎啡成癮的發(fā)生。