常溫體外循環(huán)對大鼠海馬BDNFmRNA表達的影響.pdf

1、目的：通過建立大鼠體外循環(huán)(CPB)模型，觀察常溫體外循環(huán)對大鼠海馬神經(jīng)元凋亡及腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(BDNF)mRNA表達的影響。 方法：選擇成年雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠20只，隨機分為體外循環(huán)組(CPB組，n=10)和假手術組(Sham組，n=10)。兩組動物麻醉(10％水合氯醛350mg·kg-1肌注)后經(jīng)口氣管插管并進行機械通氣，經(jīng)右側上腔靜脈置入右心房插管及經(jīng)尾動脈置入動脈灌注管，肝素抗凝(500U·

2、kg-1)。CPB組采用常溫CPB(37.8℃～38.7℃)，經(jīng)右側上腔靜脈腔房引流、尾動脈灌注，灌注流量為(120～150)mL·kg-1·min-1，總轉流時間60min；Sham組除不經(jīng)歷CPB外，其余操作與CPB組相同。實驗中監(jiān)測體溫和血流動力學指標，檢測動脈血氣、電解質和血液稀釋度指標。Sham組于術后3h、CPB組于停機后2h處死動物，立即斷頭取腦分離海馬組織，左側海馬放入-70℃液氮罐保存以供BDNFmRNA檢測，右側海馬

3、放入4％多聚甲醛溶液保存以供電鏡觀察。BDNFmRNA檢測采用逆轉錄聚合酶鏈式反應(RT-PCR)的方法。 結果：1.兩組動物的生理指標和實驗經(jīng)過：20.只大鼠均安全度過外科動物實驗過程。兩組動物各項生理指標的基礎值無明顯差別(p>0.05)。各個時間點中兩組的體溫(T)、心率(HR)、電解質(Na+、K+、iCa2+)等指標無明顯差異(P>0.05)。CPB組轉流中及停機后平均動脈壓(MAP)、中心靜脈壓(CVP)、動脈血二氧

4、化碳分壓(PaCO2)、動脈血氧分壓(PaO2)、紅細胞壓積(Hct)、血紅蛋白含量(Hb)等指標變化較明顯(P<0.05)，表現(xiàn)為MAP降低、CVP升高、PaCO2升高、PaO2降低、Hct及Hb降低，符合臨床CPB的病理生理變化。2.海馬的電鏡超微結構：Sham組海馬神經(jīng)元基本正常，線粒體形態(tài)正常，嵴清晰可見，核旁粗面內質網(wǎng)豐富，并可見核糖體附著，偶爾可見血管內皮細胞腫脹。CPB組海馬的神經(jīng)元腫脹、凋亡，核固縮、出現(xiàn)空泡區(qū)、核常染色

5、體消失，核膜斷裂、消失，胞質內細胞器減少、消失，線粒體和粗面內質網(wǎng)溶解，血管內皮細胞明顯腫脹。3.海馬BDNFmRNA的表達：RT-PCR擴增的產(chǎn)物電泳圖中CPB組的bdnf電泳條帶明亮、清晰，Sham組的bdnf電泳條帶暗淡、模糊，兩組β-actin電泳條帶的寬度和亮度差別不大。經(jīng)凝膠成像分析系統(tǒng)計算結果顯示，CPB組的bdnf/β-actin比值大于Sham組(P<0.05)，表明CPB組海馬BDNFmRNA表達高于Sham組。