α-硫辛酸緩釋片的制備及其對(duì)新西蘭兔藥效學(xué)研究.pdf

1、研究背景： 糖尿病(diabetes mellitus，DM)是由于胰島素分泌缺陷和(或)胰島素作用缺陷而引起慢性血葡萄糖水平增高為特征的代謝性疾病。近年來(lái)，由于生活水平的提高、飲食結(jié)構(gòu)的改變、日趨緊張的生活節(jié)奏以及少動(dòng)多坐的生活方式等諸多因素，全球糖尿病發(fā)病率增長(zhǎng)迅速，糖尿病已經(jīng)成為繼腫瘤、心血管病變之后第三大嚴(yán)重威脅人類(lèi)健康的慢性疾病，具有高致死率、高致殘率和高醫(yī)療花費(fèi)的特征，成為當(dāng)前世界各國(guó)共同面對(duì)的公共健康問(wèn)題。全世界糖

2、尿病病人由1997年的1.35億發(fā)展到2000年的1.5億，2001年則達(dá)到了1.77億，如無(wú)有力的干預(yù)，2025年全球糖尿病患者可達(dá)3億，防治形勢(shì)嚴(yán)峻。隨著我國(guó)老齡人口、城市人口的不斷增加和生活方式的改變，中國(guó)已經(jīng)成為糖尿病第二大國(guó)。2003年我國(guó)患病人數(shù)已達(dá)2400萬(wàn)人，估計(jì)到2030年可發(fā)展到4300萬(wàn)人。近年來(lái)，青少年患2型糖尿病的患者明顯增加，而多數(shù)糖尿病患者的年齡處于工作段年齡。隨著糖尿病病程的進(jìn)展，各種慢性并發(fā)癥的發(fā)生率也

3、逐步增加。糖尿病并發(fā)癥是引起糖尿病患者致死、致殘的主要原因，尤其是心腦血管并發(fā)癥已經(jīng)成為糖尿病最主要的死亡原因。因此糖尿病及其并發(fā)癥防治將是中國(guó)一個(gè)嚴(yán)重的公共衛(wèi)生問(wèn)題。 尋求更好的糖尿病治療方法一直是醫(yī)學(xué)研究的重點(diǎn)和熱點(diǎn)。目前糖尿病的治療方法多種多樣，主要有藥物治療、胰島素及其類(lèi)似物治療、干細(xì)胞及胰島細(xì)胞移植治療和基因治療，但仍只能處于良好控制，不能根治的水平。近年來(lái)的研究發(fā)現(xiàn)，線粒體電子傳遞呼吸鏈超氧化物產(chǎn)生過(guò)多是高糖介導(dǎo)組織

4、損傷的主要原因，氧化應(yīng)激狀態(tài)是糖尿病慢性并發(fā)癥發(fā)生發(fā)展的“共同土壤”。氧化應(yīng)激是指機(jī)體內(nèi)高活性分子如活性氧類(lèi)自由基(reactive oxygen species，ROS)和活性氮類(lèi)自由基(reactive nitrogen species，RNS)產(chǎn)生過(guò)多或消除減少，而導(dǎo)致組織受損。高血糖狀態(tài)下自由基通過(guò)多個(gè)途徑引起機(jī)體損傷，包括晚期糖基化終產(chǎn)物(advanced glycation end products，AGEs)增多，多元醇通

5、路和己糖胺通路活性增高，蛋白激酶C(protein kinase C，PKC)活化。氧化應(yīng)激不僅僅是ROS的產(chǎn)生增多，更準(zhǔn)確的是氧化與抗氧化之間的一種不平衡?？寡趸到y(tǒng)在糖尿病及其并發(fā)癥發(fā)生過(guò)程中發(fā)揮著重要的作用。改善氧化應(yīng)激狀態(tài)可能成為防治糖尿病慢性并發(fā)癥的有效措施。因此，抗氧化劑治療將成為糖尿病藥物治療的重要組成部分。 α-硫辛酸(alpha-lipoic acid，ALA)是一種八碳脂肪酸，在生物體內(nèi)合成較少。它是所有天然

6、抗氧化劑中功能最多且活性最強(qiáng)的抗氧化劑，被譽(yù)為“萬(wàn)能抗氧化劑”。在德國(guó)，α-硫辛酸用于治療糖尿病誘導(dǎo)的神經(jīng)病變已達(dá)30年以上。研究發(fā)現(xiàn)α-硫辛酸可抑制AGEs的形成，清除自由基和活性氧，減弱氧化應(yīng)激，同時(shí)還能提高骨骼肌細(xì)胞，脂肪細(xì)胞及2型糖尿病動(dòng)物的胰島素敏感性、增強(qiáng)葡萄糖代謝，是預(yù)防和治療糖尿病的重要措施。研究還發(fā)現(xiàn)，靜脈輸注α-硫辛酸，可極大地提高胰島素介導(dǎo)的葡萄糖代謝(30-50％)，而口服α-硫辛酸只有少量的改善(<20％)。這

7、可能是與靜脈輸注相比，口服α-硫辛酸后廣泛的首過(guò)效應(yīng)(>50％)和較短的血漿半衰期(<0.5小時(shí))，血漿中α-硫辛酸有效濃度持續(xù)時(shí)間較短所致。為了獲得血漿中持久而有效的血藥濃度，一般的口服藥每天至少需要服藥6次。研制一種硫辛酸緩釋遞藥系統(tǒng)有利于減少服藥次數(shù)，延長(zhǎng)半衰期，增加穩(wěn)定性，提高患者依從性。目前有關(guān)α-硫辛酸制劑種類(lèi)主要有注射劑、膠囊、軟膠囊、片劑等，但國(guó)內(nèi)未見(jiàn)其緩釋制劑的研制和相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道。制備一種α-硫辛酸新劑型-α-硫辛酸緩

8、釋片，將具有巨大的市場(chǎng)前景和很好的經(jīng)濟(jì)效益。 目的： 1．研究α-硫辛酸緩釋片的制備及體外釋放特性； 2．觀察α-硫辛酸緩釋片對(duì)正常新西蘭家兔降血糖的藥效和安全性； 3．建立高效液相色譜法測(cè)定新西蘭兔血漿中α-硫辛酸的濃度。 方法： 1．α-硫辛酸緩釋片的制備及溶出度的研究：采用乳糖、羥丙甲基纖維素等作為骨架材料制備本品。采用HPLC法測(cè)定α-硫辛酸濃度。色譜柱為HYPERSILBDS C

9、18柱(250 mm×4.6 mm，5μm)，流動(dòng)相為磷酸二氫鉀：乙腈(50：50，V/V)，流速1.0 ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)219 nm，通過(guò)溶出度試驗(yàn)篩選處方并評(píng)價(jià)緩釋效果。 2．α-硫辛酸緩釋片對(duì)正常新西蘭兔的藥效及安全性研究：5只葡萄糖負(fù)荷新西蘭家兔分別給以生理鹽水和α-硫辛酸緩釋片(含α-硫辛酸300mg)1片后，測(cè)定灌胃前和灌胃后15min、30min、60min、120min、240min、360min、480m

10、in血糖及胰島素。α-硫辛酸緩釋片連續(xù)給藥21天，每日1次，每次1片，測(cè)定給藥前及給藥后1、3、5、7、14、21天血糖，測(cè)定給藥前后糖化血清蛋白、胰島素、肝腎功能及血脂。 3．高效液相色譜法測(cè)定新西蘭兔血漿中α-硫辛酸濃度：新西蘭兔采血后離心得血漿經(jīng)酶水解后，用Baker phenyl固相萃取小柱提取血漿中α-硫辛酸，采用HPLC檢測(cè)。色譜柱為HYPERSIL BDS C18柱(250 mm×4.6 mm，5μm)，流動(dòng)相為磷

11、酸二氫鉀：乙腈(50：50,V/V)，流速1.0 ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)230 nm。 結(jié)果： 1．建立了測(cè)定制劑及溶出介質(zhì)中α-硫辛酸濃度的HPLC法。α-硫辛酸在10μg/mL～400 μg/ml范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系；10、200、400μg/mlα-硫辛酸日內(nèi)RSD是1.17％，日間RSD是1.20％；室溫下α-硫辛酸溶液在24h內(nèi)有良好的穩(wěn)定性；平均回收率是98.50％，RSD是1.06％。2@2．本研究所制備的

12、α-硫辛酸緩釋片含α-硫辛酸300mg，總重量約600mg，在磷酸鹽緩沖液中可持續(xù)釋藥10 h以上。3．在新西蘭兔葡萄糖負(fù)荷實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)服用α-硫辛酸緩釋片30min和480min后血糖明顯降低，15min后開(kāi)始出現(xiàn)胰島素分泌下降。α-硫辛酸緩釋片連續(xù)給藥14天后出現(xiàn)餐后2h及給藥后8h隨機(jī)血糖下降，連續(xù)給藥21天后出現(xiàn)空腹血糖下降，α-硫辛酸緩釋片連續(xù)給藥21天未出現(xiàn)肝功能損害，對(duì)血脂亦未見(jiàn)明顯影響。 4．建立了測(cè)定血漿中α-硫

13、辛酸濃度的HPLC方法。血漿中α-硫辛酸濃度在5～100μg/ml范圍內(nèi)具有良好線性關(guān)系；5、40、80μg/ml3種濃度α-硫辛酸的平均萃取回收率是79.07％，RSD是3.39％；10、40、80μg/ml 3種濃度α-硫辛酸的日內(nèi)RSD是5.27％，日間RSD是7.53％；新西蘭兔口服α-硫辛酸片(300 mg)0.5h后測(cè)定血漿中α-硫辛酸濃度為(11.08±1.79)μg/ml。 結(jié)論： 1．通過(guò)處方篩選所制備