去勢大鼠神經(jīng)退變的線粒體機(jī)制：生物能量障礙可能是其最后通路.pdf

1、背景：阿爾茨海默病(Alzheimer’s disease，AD)是一種伴有進(jìn)行性認(rèn)知和記憶功能減退的中樞神經(jīng)系統(tǒng)退變性疾病。流行病學(xué)調(diào)查顯示絕經(jīng)后女性AD的發(fā)病率顯著高于男性，是男性發(fā)病率的2～3倍。雌激素替代療法(ERT)可減少或推遲AD的發(fā)病。但是，ERT的應(yīng)用由于存在增加乳腺癌和子宮內(nèi)膜癌的發(fā)病率的危險(xiǎn)性而受到限制。所以，金雀異黃酮，一種具有弱雌激素活性但又沒有明顯副作用的植物雌激素，有希望替代雌激素，成為預(yù)防和治療AD的新藥。

2、 目前，絕經(jīng)后中樞神經(jīng)退變及雌激素和植物雌激素的神經(jīng)保護(hù)作用不明，一些研究表明，線粒體機(jī)能紊亂是AD發(fā)病的重要機(jī)制之一。而由于線粒體機(jī)能紊亂導(dǎo)致的生物能量障礙，很可能是眾多導(dǎo)致絕經(jīng)后女性中樞神經(jīng)退變機(jī)制的最后通路之一。 目的：本課題采用去卵巢Sprague-DaWley大鼠模型模擬絕經(jīng)后女性的病理改變，并采用金雀異黃酮和苯甲酸雌二醇替代體內(nèi)的內(nèi)源性雌二醇作為陽性對照，觀察海馬組織ATP含量，海馬線粒體ATP含量及線粒體A

3、TP合成率的變化，以探討絕經(jīng)后女性中樞神經(jīng)系統(tǒng)退變及雌激素和植物雌激素神經(jīng)保護(hù)作用的線粒體機(jī)制。 方法： 1、海馬ATP含量的檢測：37只2～3月齡健康雌性SD大鼠隨機(jī)分為9組：①正常對照組、②去勢2d組(OVX-2-day)、③去勢4d組(OVX-4-day)、④去勢6d組、⑤去勢8d組(OVX-8-day)、⑥去勢10d組(OVX-10-day)、⑦去勢12d組(OVX-12-day)、⑧苯甲酸雌二醇組(OVX-EB

4、，50 μl 5﹪的苯甲酸雌二醇)、⑨金雀異黃酮組(OVX-genistein，50 μl 25﹪的金雀異黃酮)。正常對照組不經(jīng)任何處理即處死；去勢2、4、6、8、10、12d組則分別在摘除雙側(cè)卵巢后2、4、6、8、10、12d處死；苯甲酸雌二醇組和金雀異黃酮組在摘除卵巢后即開始皮下注射給藥，隔日一次，并于去勢后第6天處死。 2、海馬線粒體ATP含量的檢測：20只2～3月齡健康雌性SD大鼠隨機(jī)分為4組：①正常對照組、②去勢組(O

5、VX-only)、③苯甲酸雌二醇組(OVX-EB，50 μl 5﹪的苯甲酸雌二醇)、④金雀異黃酮組(OVX-genistein，50 μl 25﹪的金雀異黃酮)。正常對照組不經(jīng)任何處理即處死；去勢組則在摘除雙側(cè)卵巢后6d處死；苯甲酸雌二醇組和金雀異黃酮組在摘除卵巢后即開始皮下注射給藥，隔日一次，并于去勢后第6天處死。 3、海馬線粒體ATP合成率的檢測：20只2～3月齡健康雌性SD大鼠隨機(jī)分為4組：①正常對照組、②去勢組(OVX-

6、only)、③苯甲酸雌二醇組(OVX-EB，50 μl 5﹪的苯甲酸雌二醇)、④金雀異黃酮組(OVX-genistein，50 μl 25﹪的金雀異黃酮)。正常對照組不經(jīng)任何處理即處死；去勢組則在摘除雙側(cè)卵巢后6d處死；苯甲酸雌二醇組和金雀異黃酮組在摘除卵巢后即開始皮下注射給藥，隔日一次，并于去勢后第6天處死。3部分實(shí)驗(yàn)均采用反相高效液相法(HPLC)分別對ATP含量進(jìn)行測定。 結(jié)果： ①海馬ATP含量的檢測：單因素方差

7、分析顯示在去卵巢后的2、4、6、8、10、12d組，海馬ATP含量的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)。最小有意義t(LSDt)檢驗(yàn)表明，海馬ATP含量在正常對照組，去勢后2， 4， 10d組，苯甲酸雌二醇組和金雀異黃酮組之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p>0.05)，但去勢后6d組的海馬ATP含量顯著低于其他組(p<0.05)。去勢后8d組的海馬ATP含量與去勢后6d組的海馬ATP含量的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p>0.05)。 ②海馬線粒體AT

8、P含量的檢測：單因素方差分析顯示各組的線粒體ATP含量之間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p>0.05)。LSD t檢驗(yàn)表明，線粒體ATP含量在正常對照組，苯甲酸雌二醇組和金雀異黃酮組之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p>0.05)，但去勢組的線粒體ATP含量顯著低于其他組(p>0.05)。 ③海馬線粒體ATP合成率的檢測：單因素方差分析顯示各組的線粒體ATP合成率之間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p>0.05)。LSD t檢驗(yàn)表明，線粒體ATP合成率在正常對照

9、組，苯甲酸雌二醇組和金雀異黃酮組之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p>0.05)，但去勢組的線粒體ATP合成率顯著低于其他組(p>0.05)。 結(jié)論：去勢后海馬ATP含量呈現(xiàn)一過性改變，提示雌激素撤退后腦組織可能存在能量代謝障礙；線粒體ATP含量和線粒體ATP合成率降低，表明雌激素撤退可致線粒體機(jī)能減低，但其機(jī)制還有待進(jìn)一步探討；金雀異黃酮和雌二醇則有助于保護(hù)線粒體機(jī)能從而恢復(fù)線粒體正常的能量代謝。這些結(jié)果表明，雌激素撤退后由線粒體功能紊亂