線粒體12S rRNA A839G突變可能是耳聾相關(guān)的線粒體基因新突變.pdf

1、目的：
　　1.對已收集的浙江沿海地區(qū)聾啞學校、各大醫(yī)院耳鼻喉科門診非綜合征型耳聾(nonsyndromic sensorineural hearing loss，NSHL)病例和已篩查出的藥物性耳聾相關(guān)線粒體12S rRNA上的基因突變位點的進行總結(jié)與分析，尋找新的突變位點，完善線粒體12S rRNA與耳聾的相關(guān)性研究。
　　2.對一例攜帶有線粒體12S rRNA A839G突變的家系進行臨床和遺傳學分析，從而研究A839

2、G突變與耳聾的相關(guān)性。
　　3.構(gòu)建含有線粒體12S rRNA A839G突變的耳聾家系的永生化淋巴母細胞系(lymphoblastoid cell lines，LCLs)，為后續(xù)功能實驗作基礎(chǔ)準備并可永久保存聾病遺傳資源。
　　方法：
　　1.對浙江沿海各地區(qū)已采集的1743例NSHL患者和712例正常對照的臨床資料及其已篩查出的可能與藥物性耳聾相關(guān)的線粒體12S rRNA基因突變位點信息進行收集、整理和評估。

3、>　　2.針對已篩查出的可能與藥物性耳聾相關(guān)的線粒體12S rRNA上相關(guān)基因突變位點及家系資料，分析其保守性指數(shù)(Conservation Index，CI)、基因多態(tài)性及家系臨床特征等。
　　3.對一個攜帶有線粒體12S rRNA A839G突變家系進行家系回訪，完善家系各成員的臨床資料。
　　4.對先證者線粒體12S rRNA作基因組全序分析，結(jié)合12S rRNA的二級結(jié)構(gòu)評估839位點突變對其可能造成的影響，分析家系

4、內(nèi)部分成員的線粒體單體型，研究線粒體12S rRNA A839G突變與耳聾的相關(guān)性。
　　5.利用EB病毒(Epstein-Barr virus，EBV)轉(zhuǎn)染外周血B淋巴細胞(B lymphocyte cell，BLC)的方法，構(gòu)建含線粒體12S rRNA A839G突變家系的LCLs。
　　結(jié)果：
　　1.對1743例NSHL患者和712例正常對照進行線粒體12S rRNA基因突變篩查結(jié)果分析后發(fā)現(xiàn)，13個基因突變位

5、點可能與藥物性耳聾相關(guān)。其中6個已報道，分別是A745G、A856G、A1027G、C1310T、T1413C、T1452C，7個未報道，分別是A747G、C792T、A801G、A839G、C1192A、A1331G、A1374G。
　　2.通過分析發(fā)現(xiàn)只在NSHL患者中存在12S rRNA A839G突變，且該位點高度保守，正常對照組未發(fā)現(xiàn)，很可能與藥物性耳聾的發(fā)生密切相關(guān)。
　　3.線粒體12SrRNA A839G突變

6、耳聾家系遺傳方式為母系遺傳,先證者家庭內(nèi)母系成員均攜帶有12S rRNA A839G突變，而此突變位點未在父系成員及配偶中發(fā)現(xiàn)。
　　4.在發(fā)現(xiàn)有線粒體12S rRNA A839G突變的5個家系之間，其發(fā)病年齡、聽力損失程度、聽力曲線類型有所差異。在同一家系內(nèi)，先證者與其他發(fā)病的母系成員均發(fā)現(xiàn)有A839G突變，而在發(fā)病年齡、病情嚴重程度亦存在著差異。
　　5.對一個攜帶有線粒體12S rRNA A839G突變家系的先證者線粒

7、體全序分析發(fā)現(xiàn)12S rRNA上有4個基因突變，其中A839G突變較特殊，其保守性極高，且位于預測的12S rRNA二級結(jié)構(gòu)的莖上，CI＞78％且沒有在對照組中出現(xiàn)，家系先證者及其母系成員線粒體DNA(mitochondrial DNA，mtDNA)單體型為D4。
　　6.構(gòu)建了含線粒體12S rRNA A839G突變的耳聾家系成員及正常對照樣本的LCLs，細胞凍存復蘇后增殖狀態(tài)良好，且測序發(fā)現(xiàn)仍存在12S rRNA A839G突

8、變。
　　結(jié)論：
　　1.NSHL患者線粒體12S rRNA基因突變頻譜中，與藥物性耳聾相關(guān)的突變位點發(fā)現(xiàn)存在13個，正常對照人群中未發(fā)現(xiàn)該突變，推測線粒體12S rRNA基因突變很可能是疾病的主要致病形式。
　　2.NSHL患者與正常對照人群對比后發(fā)現(xiàn)12S rRNA上存在的7個突變位點不是常見的A1555G和C1494T突變或已報道的突變位點，分析發(fā)現(xiàn)該位點在13種靈長類物種中均高度保守，其突變改變了線粒體12S

9、rRNA的結(jié)構(gòu)，可能影響線粒體12S rRNA的穩(wěn)定性，導致功能障礙，從而增加了部分耳毒性藥物的敏感性，引發(fā)耳聾。
　　3.線粒體12S rRNA A839G突變保守性高，未在正常對照發(fā)現(xiàn)，且該突變位于12S rRNA二級結(jié)構(gòu)的莖上，導致及線粒體12S rRNA二級結(jié)構(gòu)發(fā)生潛在的結(jié)構(gòu)和功能改變，很可能是一個耳聾相關(guān)的線粒體基因新突變。
　　4.同一家系內(nèi)患者發(fā)病年齡、病情嚴重程度存在差異，說明耳聾的發(fā)生還可能與自身身體素質(zhì)、