力學(xué)刺激對兔角膜基質(zhì)細(xì)胞增殖及bFGF表達(dá)的影響.pdf

1、準(zhǔn)分子激光原位角膜磨鑲術(shù)(laser in situ keratomileusis,LASIK)是目前開展較為廣泛且應(yīng)用于臨床效果良好的治療近視的角膜屈光手術(shù)。每年有近百萬人接受LASIK手術(shù)治療。LASIK手術(shù)主要通過改變角膜中央光學(xué)區(qū)的曲率,使屈光不正現(xiàn)象得以改善。此手術(shù)在角膜瓣下的基質(zhì)層中進(jìn)行,這樣做既保存了角膜上皮層和前彈力層的完整度,同時又可防止角膜上皮下霧狀渾濁(Haze)的發(fā)生。
　　 LASIK術(shù)后角膜損傷修復(fù)過

2、程是多因素參與的復(fù)雜過程。其中,力學(xué)環(huán)境的改變對LASIK術(shù)后角膜組織的修復(fù)是一個不可忽視的因素。LASIK術(shù)后角膜層變薄,在相同的眼內(nèi)壓作用下,角膜所受的應(yīng)力明顯增大,角膜成纖維細(xì)胞的力學(xué)環(huán)境發(fā)生了變化,可能影響其生長、增殖。堿性成纖維細(xì)胞生長因子(basic Fibroblast Growth Factor,bFGF)既能促進(jìn)傷口愈合與受損組織的修復(fù)還能促使受損細(xì)胞發(fā)生相應(yīng)的形態(tài)學(xué)改變。因此研究在體及離體不同力學(xué)環(huán)境下,角膜組織及角

3、膜成纖維細(xì)胞中bFGF的表達(dá)與分布,以及力學(xué)刺激對兔角膜基質(zhì)細(xì)胞增殖的影響,探究力學(xué)因素在LASIK術(shù)后角膜損傷修復(fù)中的作用,為臨床治療近視提供有力的理論依據(jù)和指導(dǎo)。本文的主要研究內(nèi)容及結(jié)論如下:
　　 1.建立不同切削量的LASIK手術(shù)動物模型,使在體角膜處于不同力學(xué)環(huán)境中,采用免疫熒光染色觀察角膜上皮及基質(zhì)層中bFGF表達(dá);蘇木素-伊紅(HE)染色觀察角膜基質(zhì)細(xì)胞增殖的變化。研究發(fā)現(xiàn):bFGF在上皮及基質(zhì)層中均有表達(dá),但基質(zhì)

4、層中熒光強(qiáng)度總體高于上皮層,70％一周組基質(zhì)層熒光強(qiáng)度明顯強(qiáng)于上皮層(P＜0.05);與正常組相比,術(shù)后1周角膜細(xì)胞數(shù)量先減少,術(shù)后1月細(xì)胞數(shù)量增多。同一手術(shù)方式術(shù)后1月細(xì)胞數(shù)量顯著多于1周(P<0.05)。
　　 2.于LASIK術(shù)后1周和1月處死實(shí)驗(yàn)動物提取組織蛋白,采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)方法檢測bFGF含量。研究發(fā)現(xiàn):LASIK術(shù)后1周,角膜基質(zhì)床殘余30%組與對照組相比,bFGF含量顯著增高(P<0.05);

5、LASIK術(shù)后1月,角膜基質(zhì)床殘余30%組bFGF含量回落至正常水平,不同手術(shù)組之間無顯著性差異;不同時間點(diǎn)同一手術(shù)方式之間比較發(fā)現(xiàn),僅角膜基質(zhì)床殘余30%組1周和1月有顯著差異(P<0.05)。
　　 3.體外采用Fx-4000細(xì)胞力學(xué)柔性基底拉伸系統(tǒng),對原代提取的兔角膜成纖維細(xì)胞分別進(jìn)行頻率為0.1Hz、拉伸幅度為5%、10%、15%的周期性機(jī)械拉伸,并于6h和24h收集細(xì)胞培養(yǎng)液上清,采用ELISA法檢測bFGF的含量。研