脈沖電刺激對(duì)HPc2細(xì)胞增殖及分化的影響.pdf

1、目的:觀察脈沖電刺激對(duì)H9c2細(xì)胞增殖的抑制作用，探討脈沖電刺激對(duì)H9c2細(xì)胞分化的誘導(dǎo)作用。
　　方法:
　　1、H9c2細(xì)胞由重慶醫(yī)科大學(xué)老年科教授李剛惠贈(zèng)。利用新型材料FTO導(dǎo)電玻璃自制3 cm×3 cm大小培養(yǎng)皿，將H9c2細(xì)胞接種到培養(yǎng)皿中培養(yǎng)，每日在倒置顯微鏡下觀察其形態(tài)。
　　2、用不同頻率(0、1、5、10、50、100 Hz)、電壓(0、5、10、20、40、50 V)、時(shí)間(0、1、2、4、6、8h

2、/d)的組合脈沖電刺激作用于大鼠H9c2細(xì)胞，以5-氮胞苷(5-AzaC)作為干預(yù)因素對(duì)照。
　　3、對(duì)電刺激后的H9c2細(xì)胞實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組利用MTT法檢測(cè)其細(xì)胞增殖率。
　　4、采用免疫熒光細(xì)胞化學(xué)染色對(duì)刺激后H9c2細(xì)胞進(jìn)行心肌肌鈣蛋白(cTnT)及八聚體結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子4(Oct4)的表達(dá)檢測(cè)。
　　5、采用RT-PCR法檢測(cè)各實(shí)驗(yàn)組H9c2細(xì)胞的cTnT、肌球蛋白重鏈α（α-MHC）mRNA表達(dá)。
　　結(jié)果:

3、
　　1、脈沖電刺激能抑制H9c2細(xì)胞增殖(P＜0.05)，脈沖電刺激的參數(shù)為頻率=1 Hz、時(shí)間=4 h/d、電壓=10V時(shí)對(duì)H9c2細(xì)胞增殖的抑制作用最大且不致細(xì)胞死亡。
　　2、用此參數(shù)脈沖電刺激作用于H9c2細(xì)胞2周后細(xì)胞Oct4表達(dá)減少(P＜0.05)，而cTnT和α-MHC表達(dá)仍十分明顯。
　　結(jié)論:脈沖電刺激能抑制大鼠胚胎心臟組織成肌細(xì)胞株H9c2細(xì)胞的增殖，同時(shí)cTnT和α-MHC表達(dá)增強(qiáng)，Oct4表達(dá)