TRAF6基因沉默對(duì)LPS刺激下人牙周膜細(xì)胞增殖和成骨分化的影響.pdf

1、目的：
　　使用小干擾 RNA(siRNA)沉默人牙周膜細(xì)胞(HPDLCs)中腫瘤壞死因子受體相關(guān)因子6(TRAF6)的基因；觀察在LPS刺激下，TRAF6基因沉默對(duì)HPDLCs增殖能力和成骨分化能力的影響。
　　方法：
　?。?）酶消化聯(lián)合組織塊法體外培養(yǎng)HPDLCs，并進(jìn)行免疫細(xì)胞化學(xué)鑒定。（2）實(shí)驗(yàn)分組：TRAF6 siRNA組、Control SiRNA組、轉(zhuǎn)染試劑組、空白對(duì)照組，脂質(zhì)體法將TRAF6 siRN

2、A、control siRNA分別轉(zhuǎn)染入對(duì)應(yīng)組HPDLCs中，轉(zhuǎn)染試劑組僅加入等量的轉(zhuǎn)染試劑，空白對(duì)照組不做任何處理，再使用10μg/ml LPS刺激HPDLCs，RT-PCR、Western blot檢測(cè)細(xì)胞中TRAF6的mRNA及蛋白的表達(dá)情況。（3）CCK-8法檢測(cè)TRAF6 siRNA組、Control SiRNA組、轉(zhuǎn)染試劑組在轉(zhuǎn)染后使用含或不含10μg/ml LPS的培養(yǎng)基培養(yǎng)24h、48h時(shí)細(xì)胞增殖情況。（4）使用10μg

3、/ml LPS+成骨分化誘導(dǎo)培養(yǎng)基培養(yǎng)轉(zhuǎn)染細(xì)胞3d，堿性磷酸酶檢測(cè)試劑盒檢測(cè)ALP的活性，RT-PCR檢測(cè)Runx-2和I型膠原蛋白（Col-I）基因表達(dá)情況。
　　結(jié)果:
　?。?）免疫細(xì)胞化學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示 HPDLCs培養(yǎng)成功；（2）TRAF6 siRNA組的TRAF6 mRNA和蛋白的表達(dá)水平與其余三組相比顯著下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.001），表明TRAF6基因沉默的細(xì)胞模型構(gòu)建成功；（3）CCK-8法檢測(cè)結(jié)果

4、顯示，10μg/ml LPS刺激各組細(xì)胞24、48h時(shí)，LPS刺激下Control SiRNA組、轉(zhuǎn)染試劑組的 A值要高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.001），表明 LPS刺激能促進(jìn)HPDLCs增殖；LPS刺激24h時(shí)TRAF6 siRNA組在LPS刺激下A值與未受LPS刺激組無(wú)差異，LPS刺激48h時(shí)TRAF6siRNA組的A值在LPS刺激組低于未受LPS刺激組，表明TRAF6基因沉默能抑制LPS引起的HPDLCs增殖；（4）1

5、0μg/ml LPS+成骨分化誘導(dǎo)培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞3d后，TRAF6 siRNA組的ALP表達(dá)量要高于空白對(duì)照、轉(zhuǎn)染試劑組和 control siRNA組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05）；TRAF6 siRNA組的Runx-2和Col-I的mRNA表達(dá)均明顯高于其余三組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05），表明TRAF6基因沉默能提高LPS刺激下HPDLCs的成骨能力。
　　結(jié)論:
　　TRAF6基因沉默能抑制LPS刺激下HP