TRAF6基因沉默對LPS刺激下人牙周膜細胞增殖和成骨分化的影響.pdf

1、目的：
　　使用小干擾 RNA(siRNA)沉默人牙周膜細胞(HPDLCs)中腫瘤壞死因子受體相關因子6(TRAF6)的基因；觀察在LPS刺激下，TRAF6基因沉默對HPDLCs增殖能力和成骨分化能力的影響。
　　方法：
　　（1）酶消化聯(lián)合組織塊法體外培養(yǎng)HPDLCs，并進行免疫細胞化學鑒定。（2）實驗分組：TRAF6 siRNA組、Control SiRNA組、轉染試劑組、空白對照組，脂質體法將TRAF6 siRN

2、A、control siRNA分別轉染入對應組HPDLCs中，轉染試劑組僅加入等量的轉染試劑，空白對照組不做任何處理，再使用10μg/ml LPS刺激HPDLCs，RT-PCR、Western blot檢測細胞中TRAF6的mRNA及蛋白的表達情況。（3）CCK-8法檢測TRAF6 siRNA組、Control SiRNA組、轉染試劑組在轉染后使用含或不含10μg/ml LPS的培養(yǎng)基培養(yǎng)24h、48h時細胞增殖情況。（4）使用10μg

3、/ml LPS+成骨分化誘導培養(yǎng)基培養(yǎng)轉染細胞3d，堿性磷酸酶檢測試劑盒檢測ALP的活性，RT-PCR檢測Runx-2和I型膠原蛋白（Col-I）基因表達情況。
　　結果:
　?。?）免疫細胞化學實驗結果顯示 HPDLCs培養(yǎng)成功；（2）TRAF6 siRNA組的TRAF6 mRNA和蛋白的表達水平與其余三組相比顯著下降，差異有統(tǒng)計學意義（p<0.001），表明TRAF6基因沉默的細胞模型構建成功；（3）CCK-8法檢測結果

4、顯示，10μg/ml LPS刺激各組細胞24、48h時，LPS刺激下Control SiRNA組、轉染試劑組的 A值要高于對照組，差異有統(tǒng)計學意義（p<0.001），表明 LPS刺激能促進HPDLCs增殖；LPS刺激24h時TRAF6 siRNA組在LPS刺激下A值與未受LPS刺激組無差異，LPS刺激48h時TRAF6siRNA組的A值在LPS刺激組低于未受LPS刺激組，表明TRAF6基因沉默能抑制LPS引起的HPDLCs增殖；（4）1

5、0μg/ml LPS+成骨分化誘導培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞3d后，TRAF6 siRNA組的ALP表達量要高于空白對照、轉染試劑組和 control siRNA組，差異有統(tǒng)計學意義（p<0.05）；TRAF6 siRNA組的Runx-2和Col-I的mRNA表達均明顯高于其余三組，差異有統(tǒng)計學意義（p<0.05），表明TRAF6基因沉默能提高LPS刺激下HPDLCs的成骨能力。
　　結論:
　　TRAF6基因沉默能抑制LPS刺激下HP