cDNA芯片在癌癥研究中的應(yīng)用.pdf

1、cDNA微陣列是將cDNA文庫(kù)中大量的基因序列固定于載體上，可用于同時(shí)檢測(cè)比較生物樣品中多個(gè)基因的表達(dá)狀況。近年來(lái)基因芯片被越來(lái)越多生物學(xué)家用來(lái)分析比較癌癥組織與相應(yīng)正常組織之間基因表達(dá)的差異，以期研究癌癥機(jī)制和幫助臨床治療。 在方法學(xué)上，為了提高cDNA芯片的性能，我們采用不對(duì)稱PCR的方法來(lái)制備DNA靶分子，并和傳統(tǒng)的方法在雜交動(dòng)力學(xué)方面進(jìn)行了比較。由于基因芯片上的cDNA序列包括編碼鏈和非編碼鏈，這使得它們會(huì)和樣本中的cD

2、NA發(fā)生競(jìng)爭(zhēng)性的雜交，增加了實(shí)驗(yàn)的復(fù)雜性，降低了雜交效率和靈敏度。為了解決這個(gè)問(wèn)題，我們使用不對(duì)稱PCR來(lái)制備大量的單鏈cDNA靶分子，用于制作芯片。在實(shí)驗(yàn)中，我們系統(tǒng)的比較了ssDNA和dsDNA的雜交行為，而且對(duì)不對(duì)稱PCR的參數(shù)進(jìn)行了優(yōu)化，使它能夠有效的制備高重復(fù)性，精確性和可靠性的ds-ssDNA芯片。 在癌癥研究的課題中，本人對(duì)3種癌癥，即急性白血病、腦膜瘤和前列腺癌的表達(dá)譜進(jìn)行了分析。結(jié)合生物信息學(xué)、統(tǒng)計(jì)學(xué)和分析軟件

3、，篩選出了一批十分具有研究?jī)r(jià)值的基因，許多還是在癌癥中首次報(bào)道。從系統(tǒng)和整體的角度，對(duì)急性白血病的發(fā)生發(fā)展機(jī)制進(jìn)行了探討，構(gòu)建了一條腦膜瘤發(fā)生發(fā)展的通路，對(duì)在前列腺癌中差異表達(dá)，且和激素相關(guān)的基因的網(wǎng)絡(luò)相互作用進(jìn)行了闡述。進(jìn)一步的，結(jié)合樣本的臨床資料情況，對(duì)急性白血病中難治易治的機(jī)制進(jìn)行了分析，對(duì)腦膜瘤中各級(jí)別間的差異進(jìn)行了探討，對(duì)前列腺癌中雄激素依賴和非依賴的機(jī)制進(jìn)行了研究。更深一步的，依據(jù)這幾種癌癥各自的特點(diǎn)，對(duì)前列腺癌中激素和血管