維持性血液透析患者血清體外誘導(dǎo)血管新生及內(nèi)皮細(xì)胞凋亡的研究.pdf

1、本文就維持性血液透析患者血清體外誘導(dǎo)血管新生及內(nèi)皮細(xì)胞凋亡進(jìn)行了研究，主要從以下幾部分展開： 第一部分：維持性血透患者血清體外誘導(dǎo)血管新生 目的：探討維持性血液透析患者血清在體外誘導(dǎo)血管新生及其機(jī)制。方法：用維持性血透患者血清(實(shí)驗(yàn)組)及健康人血清(對(duì)照組)分別培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞，倒置顯微鏡下觀察血管樣結(jié)構(gòu)形成，MTT法檢測(cè)細(xì)胞增殖，Transwell小室測(cè)定細(xì)胞遷移能力，比色法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)活性氧產(chǎn)生，細(xì)胞免疫化學(xué)和We

2、stern-blot法檢測(cè)內(nèi)皮細(xì)胞p38蛋白表達(dá)。結(jié)果：實(shí)驗(yàn)組內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)30h后有血管樣結(jié)構(gòu)形成，細(xì)胞增殖能力和細(xì)胞遷移能力均高于對(duì)照組，差異有顯著性(P＜0.05)；與對(duì)照組比較，培養(yǎng)10h內(nèi)皮細(xì)胞p-p38表達(dá)及培養(yǎng)30h細(xì)胞內(nèi)活性氧產(chǎn)生均增加，差異有顯著性(P＜0.05)，且分別與細(xì)胞增生和細(xì)胞遷移具有相關(guān)性(P＜0.05)。結(jié)論：維持性血透患者血清能夠在體外誘導(dǎo)血管新生，其機(jī)制可能與內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)p-p38表達(dá)增加及ROS產(chǎn)生增多

3、有關(guān)。 第二部分：維持性血液透析患者血清體外誘導(dǎo)新生血管的內(nèi)皮細(xì)胞凋亡 目的：進(jìn)一步探討維持性血液透析患者血清在體外誘導(dǎo)血管新生同時(shí)，也促進(jìn)了新生血管的內(nèi)皮細(xì)胞凋亡及其機(jī)制。方法：用維持性血透患者血清(實(shí)驗(yàn)組)及健康人血清(對(duì)照組)分別培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞，倒置顯微鏡下觀察血管樣結(jié)構(gòu)形成，MTT法檢測(cè)細(xì)胞增殖，用Transwell細(xì)胞小室測(cè)定細(xì)胞遷移能力，TUNEL法檢測(cè)細(xì)胞凋亡，比色法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)活性氧產(chǎn)生，細(xì)胞免疫化學(xué)

4、和Western-blot法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)p38和caspase-3表達(dá)。結(jié)果：內(nèi)皮細(xì)胞在血清培養(yǎng)基培養(yǎng)30h后，實(shí)驗(yàn)組有血管樣結(jié)構(gòu)形成，TUNEL法染色顯示，血清刺激40h后形成血管樣結(jié)構(gòu)區(qū)域的內(nèi)皮細(xì)胞出現(xiàn)凋亡，與對(duì)照組比較差異有顯著性(P＜0.05)；實(shí)驗(yàn)組內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)p-p38、caspase-3表達(dá)增多，而細(xì)胞內(nèi)ROS產(chǎn)生持續(xù)增加，與對(duì)照組比較差異有顯著性(P＜0.05)，并且ROS與內(nèi)皮細(xì)胞凋亡具有正相關(guān)性(P＜0.05)。結(jié)論：血

5、液透析患者血清既可誘導(dǎo)血管新生，又可促進(jìn)其所形成血管的內(nèi)皮細(xì)胞凋亡，其機(jī)制可能與內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)p-p38、caspase-3表達(dá)增加以及ROS產(chǎn)生增多有關(guān)。 第三部分：短期維持性血透患者與長(zhǎng)期維持性血透患者血清體外誘導(dǎo)血管新生及內(nèi)皮細(xì)胞調(diào)亡的比較 目的：比較短期血液透析患者血清與長(zhǎng)期血液透析患者血清對(duì)體外誘導(dǎo)的血管新生以及內(nèi)皮細(xì)胞凋亡的影響。方法：用長(zhǎng)期透析患者血清(長(zhǎng)期透析組)和短期透析患者血清(短期透析組)分別培養(yǎng)人臍靜

6、脈血管內(nèi)皮細(xì)胞，倒置顯微鏡下觀察血管樣結(jié)構(gòu)形成，MTT法檢測(cè)細(xì)胞增殖，用Transwell小室測(cè)定細(xì)胞遷移能力，TUNEL法檢測(cè)細(xì)胞凋亡，比色法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)活性氧產(chǎn)生，細(xì)胞免疫化學(xué)和Western-blot法檢測(cè)內(nèi)皮細(xì)胞p38和caspase-3表達(dá)。結(jié)果：長(zhǎng)期透析組內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)30h后，有血管樣結(jié)構(gòu)形成，培養(yǎng)40h出現(xiàn)新生血管的內(nèi)皮細(xì)胞凋亡，而短期透析組內(nèi)皮細(xì)胞無(wú)明顯血管新生及細(xì)胞凋亡；長(zhǎng)期透析組內(nèi)皮細(xì)胞遷移及增殖能力強(qiáng)于短期透析組，差

7、異有顯著性(P＜0.05)；長(zhǎng)期透析組內(nèi)皮細(xì)胞活性氧產(chǎn)生與細(xì)胞內(nèi)p-p38、caspase-3表達(dá)強(qiáng)于短期透析組(P＜0.05)；并且內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生的ROS與細(xì)胞的凋亡與遷移以及內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)的p-p38與內(nèi)皮細(xì)胞增生具有相關(guān)性(P＜0.05)。結(jié)論：與短期透析患者血清比較，長(zhǎng)期維持性血液透析患者血清在體外誘導(dǎo)臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞血管樣結(jié)構(gòu)形成能力更強(qiáng)，其所形成血管的內(nèi)皮細(xì)胞也易凋亡，其機(jī)制可能與長(zhǎng)期血透患者血清培養(yǎng)的內(nèi)皮細(xì)胞的活性氧產(chǎn)生增多及細(xì)