非病灶性難治性顳葉癲癇的相關(guān)基因研究.pdf

1、復旦大學博士學位論文非病灶性難治性顳葉癲癇的相關(guān)基因研究姓名：吳洵昳申請學位級別：博士專業(yè)：神經(jīng)病學指導教師：洪震20040430復旦大學博士研究生學位論文中文摘要非病灶性難治性顳葉癲癇的相關(guān)基因研究中文摘要本課題的目的在于從非病灶性顳葉癲癇入手，篩選顳葉癲癇相關(guān)基因表達譜，并通過對表達譜篩選所發(fā)現(xiàn)的差異目標基因進行驗證，從分子水平探究非病灶性顳葉癲癇可能的發(fā)病機制，以期為難治性颥葉癲癇的診斷與治療開辟新途徑。第一部分應用新興的分子生物

2、學技術(shù)——cDNA微列陣技術(shù)，利用含有18000個cDNA克隆的微列陣對難治性非病灶性顳葉癲癇患者手術(shù)切除顳葉組織標本與對照間行基因表達譜分析研究；結(jié)果顯示：兩份顳葉癲癇樣品中表達趨勢一致的已知基因主要包括：免疫相關(guān)因子、離子通道相關(guān)因子、信號轉(zhuǎn)導相關(guān)基因、細胞增殖周期因子、細胞凋亡相關(guān)基因等，在顳葉癲癇發(fā)生發(fā)展各個階段均有基因的參與，是一個復雜的調(diào)控過程。第二部分應用半定量RTPCR方法，根據(jù)前期實驗所獲得的結(jié)論，檢測12例非病灶性難

3、治性顳葉癲癇患者和10例對照顳葉組織中編碼內(nèi)向整流鉀離子通道kir23亞家族的KCNJ4mRNA表達水平的差異；結(jié)果發(fā)現(xiàn)：與對照組相比，顳葉癲癇組KCNJ4mRNA表達水平明顯降低，差異具有顯著統(tǒng)計學意義(PO05)。第三部分應用免疫組化以及Westernblot方法，分析了KCNJ4基因所編碼的內(nèi)向整流鉀通道kir23蛋白在非病灶性難治性顳葉癲癇患者與對照腦組織中的表達差異，結(jié)果顯示：kir23通道蛋白在顳葉癲癇患者顳葉組織中的表達水

4、平明顯低于對照組，差異有顯著統(tǒng)計學意義(PO05)。綜合上述結(jié)果，我們推測，KCNJ4基因表達水平的異?？赡苁蛊渚幋a的內(nèi)向整流鉀離子通道kir23亞家族的蛋白表達水平下調(diào)，從而干擾了神經(jīng)細胞膜的穩(wěn)定性、同時使得膠質(zhì)細胞對過度鉀離子負荷的緩沖能力下降；內(nèi)向整流鉀通道表達水平的變化，可能影響了其維持細胞興奮性平衡作用，最終導致癇樣放電的發(fā)生。由此，我們進一步推測，kir23通道亞家族可能是一個抗癲癇藥物的新的理想作用位點。關(guān)鍵詞：非病灶性難