鉗夾法制備貓急性眼外肌損傷模型的研究.pdf

1、急性眼外肌損傷是臨床上常見的眼病，常由于外傷、代謝性疾病等引起，造成神經(jīng)、肌肉、血管等的損傷導致一條或多條眼外肌運動受限，往往形成麻痹性斜視，出現(xiàn)復視和代償頭位。眼外肌損傷所引起的這些癥狀和體征不僅影響患者的形象外觀，同時由于復視等亦影響其正常工作和生活。急性眼外肌損傷的治療主要是藥物治療和必要時進行手術(shù)矯正斜視和復視，但尚無系統(tǒng)和規(guī)范的治療方式。由于目前對急性眼外肌損傷的研究缺乏合適的動物模型，制約了對其發(fā)生發(fā)展、疾病轉(zhuǎn)歸、藥物及手術(shù)

2、治療等的研究。
　　在我們前期的兔眼眼外肌損傷模型的研究中，嘗試使用鉗夾法制備急性眼外肌損傷的兔模型，在一定程度上可供急性眼外肌損傷的基礎(chǔ)和臨床研究（2010WOC,Berlin）。但兔眼模型尚存在不足，如使用鉗夾時間來控制損傷程度類似于缺血再灌注損傷而不完全符合外傷性急性損傷、無法進行眼位的觀察等，不能滿足急性眼外肌損傷的發(fā)病機制、功能改變和藥物防治的深入研究。貓是額面化的動物，雙眼的聯(lián)合視野與人類接近，能夠進行眼位的觀察。因此

3、，本研究擬在原有眼外肌損傷模型研究的基礎(chǔ)上，應(yīng)用鉗夾法進行貓急性眼外肌損傷模型的制備，以期能夠更好地反映和評價眼外肌損傷，為研究眼外肌損傷的發(fā)病機制和藥物防治提供合適的動物模型。
　　目的：利用鉗夾法制備貓急性眼外肌損傷模型，為急性眼外肌損傷病理機制及治療方法的研究提供模型。
　　方法：家貓72只，隨機分為A、B、C、D、E、F六組，每組12只，以30mg/kg體重腹腔注射1％戊巴比妥鈉溶液麻醉動物后，通過實施手術(shù)的方法分離

4、出左眼外直肌，然后用12.5cm直型細針（小血管）持針器直視下分別以2kg（A、D組）、4kg（B、E組）、6kg（C、F組）大小的鉗夾力鉗夾貓左眼外直肌造成損傷，右眼不做處理作為對照。每組的6只貓分別于術(shù)后第4d（A、B、C組）及第7d（D、E、F組）利用眼底血管造影儀拍攝貓雙眼眼底像，通過投射法測量貓眼眼位斜視度的方法以觀測眼位；測量眼位之后，分別于第4d（A、B、C組）、第7d（D、E、F組）將貓?zhí)幩?，取雙眼外直肌標本進行HE染色

5、、電鏡切片以觀察肌肉損傷后的病理變化，并進行增殖細胞核抗原（PCNA）和肌球蛋白重鏈（MHC）免疫組織化學染色；每組的其余6只貓分別于第4d（A、B、C組）、第7d（D、E、F組）在活體上分離出外直肌，連接于生物機能實驗系統(tǒng)，設(shè)定起始刺激強度為0V，頻率100Hz，刺激次數(shù)100次，增量為0.05V及0.5V，雙眼分別測定，比較眼外肌損傷后肌力的改變。
　　結(jié)果：在光學顯微鏡下觀察各實驗組貓外直肌損傷的HE染色病理切片，可觀察到較

6、正常對照組出現(xiàn)不同程度的肌纖維斷裂、壞死和肌漿溶解，損傷后4d主要表現(xiàn)為炎性浸潤、出血水腫及變性壞死等；損傷后7d主要表現(xiàn)為水腫減輕，纖維組織增生；鉗夾力為2kg、4kg、6kg所造成的肌肉損傷分別符合肌肉損傷Ⅱ度中輕度、中度、重度損傷標準。電鏡觀察下，主要表現(xiàn)為肌漿網(wǎng)擴張，肌小節(jié)模糊、連接斷裂，Z線、H帶及明暗帶結(jié)構(gòu)破裂、雜亂，肌絲排列紊亂，線粒體增生、空泡樣改變等。PCNA及MHC免疫組化染色可證實損傷區(qū)的肌纖維增殖，在高倍鏡下進行

7、PCNA陽性細胞核計數(shù)，損傷各組的陽性細胞核比例均較正常對照組升高，其平均陽性率約為17.83％；損傷后各組貓的外直肌表現(xiàn)出對電刺激閾值的升高，同時較對側(cè)外直肌肌力明顯下降；第4d，A組（557.333±206.507mg）與B組（283.167±91.777mg）、C組（169.167±60.261mg）的肌力之間有差別（F=12.559，P<0.05）；而第7d，D組（360.833±113.118mg）、E組（392.667±15

8、4.859mg）、F組（536±311.995mg）三組間的肌力差別無統(tǒng)計學意義（F=1.169，P>0.05）；鉗夾傷后第4、7d各實驗組貓的眼位觀測均提示眼位較術(shù)前均有不同程度的向內(nèi)偏斜，分別為A組（13.3°±5.785°）、B組（23.3°±4.476°）、C組（16.7°±9.973°）、D組（11.3°±4.885°）、E組（15.0°±5.745°）、F組（15.2°±4.535°），但除A組與B、C組之間有差別（F=3.

9、015，P<0.05）外，其余各組間兩兩比較無統(tǒng)計學意義（F=1.006，P>0.05）。
　　結(jié)論：鉗夾法可制備出貓急性眼外肌損傷模型，并可以按照需要制作不同的病理損傷分級，為進一步研究眼外肌損傷的病理變化、疾病轉(zhuǎn)歸、藥物治療等提供了穩(wěn)定的模型。
　　創(chuàng)新點:
　　1、首次采用鉗夾法制作出貓急性眼外肌損傷模型，并進行了眼外肌損傷的病理分級，為進一步研究其機制和藥物治療等研究提供了穩(wěn)定和可重復的實驗模型。
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