中國東海微生物F8712的分離鑒定及次生代謝產(chǎn)物研究.pdf

1、自1929年弗萊明從真菌中發(fā)現(xiàn)青霉素以來，微生物就成為人們獲得活性物質(zhì)的豐富資源。在過去的70多年里，已經(jīng)從微生物中發(fā)現(xiàn)了30000～50000中天然產(chǎn)物，其中10000多種有生物活性，8000多種是抗菌和抗腫瘤劑。然而由于抗藥病原菌的蔓延，新病原菌的出現(xiàn)以及癌癥和心血管等新疾病的增加，尋找新的活性物質(zhì)源泉成了當(dāng)務(wù)之急，因此科學(xué)家把注意力投向了一個(gè)尚未很好開發(fā)的巨大天然資源寶庫—海洋。1964年，Schmeer首先從文蛤中分離出具有抗腫

2、瘤活性的多糖類化合物蛤素，從此敲響了向海洋要生活活性物質(zhì)的大門，以后的幾十年里世界各國紛紛進(jìn)軍海洋，美、日、英、法、俄等國家分別推出包括開發(fā)海洋微生物藥物在內(nèi)的“海洋生物技術(shù)計(jì)劃”、“藍(lán)寶石計(jì)劃”、“海洋生物開發(fā)計(jì)劃”等。海洋也以其低溫、高壓、寡營養(yǎng)、高鹽等獨(dú)特的環(huán)境使得生活于其中的微生物產(chǎn)生出結(jié)構(gòu)新穎多樣、活性獨(dú)特的天然產(chǎn)物。 在我國的四大海域中，渤海、黃海和南海的微生物資源的研究較多，而對于東海海域微生物的大規(guī)模大面積的資源

3、調(diào)查、活性菌種的篩選還未見報(bào)道。本課題組在2003年5月，從中國東海離岸35海里的區(qū)域采集了28個(gè)海水、海泥樣本，利用稀釋涂平板法從中分離得到1043株微生物樣本，并利用稻瘟霉模型作為活性初篩模型，得到216株對稻瘟霉具有較強(qiáng)抑制活性的菌株。本論文選取了其中一株活性較強(qiáng)的F8712進(jìn)行了菌株的16SrDNA的PCR擴(kuò)增鑒定以及一系列生理生化特性的研究，并對該菌株進(jìn)行了最適發(fā)酵條件的摸索。大規(guī)模發(fā)酵后對發(fā)酵液的化學(xué)成分進(jìn)行了分離純化和化合

4、物的結(jié)構(gòu)鑒定，并對這些化合物進(jìn)行了生理活性的研究。 研究結(jié)果顯示，F(xiàn)8712菌株是一種弱嗜鹽菌，最適生長鹽度為2.5％。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，該菌在25℃、振蕩頻率120r/min、發(fā)酵初始pH值為6.0、接種量5％、72～120h內(nèi)收獲時(shí)活性最強(qiáng)；發(fā)酵培養(yǎng)基配方為蛋白胨0.4％、酵母提取物0.4％，牛肉膏1％葡萄糖1％。 16SrDNA序列擴(kuò)增、比對及構(gòu)建進(jìn)化樹顯示F8712與BacillussubtilisstrainBF