慢性缺氧心肌缺血再灌注時(shí)NO通路的變化及其意義的研究.pdf

1、研究背景和目的 長(zhǎng)期慢性缺氧會(huì)導(dǎo)致右心室重構(gòu)、低氧性肺血管重建和低氧性肺動(dòng)脈高壓等病理改變，對(duì)紫紺型先天性心臟病人心肌缺血再灌注損傷的病理變化及其機(jī)制進(jìn)行研究具有重要意義。近年的研究證明，內(nèi)皮型一氧化氮合酶/誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(eNOS/iNOS)在心肌缺血再灌注過(guò)程中的表達(dá)紊亂所致一氧化氮(NO)代謝異常在心肌損傷中扮演重要角色。目前有關(guān)NO通路在慢性缺氧心肌缺血再灌注中的變化及作用的研究尚未見(jiàn)報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)建立大鼠慢性缺氧

2、模型和離體心臟灌注左心做功模型，檢測(cè)慢性缺氧大鼠心臟缺血再灌注過(guò)程中心功能、心肌酶學(xué)指標(biāo)以及NO通路中的幾個(gè)重要物質(zhì)(包括NOS、iNOS、NO、NT和MDA等)，研究慢性缺氧心肌缺血再灌注時(shí)NO通路的變化和意義。并通過(guò)再灌注早期給予左旋精氨酸(L—arginine，NO生物合成前體)的干預(yù)，探討L-arg對(duì)慢性缺氧心肌缺血再灌注損傷的作用。 方法 本研究分為兩部分。 在第一部分研究中，建立大鼠慢性缺氧模型。成年

3、Sprague-Dawley大鼠在常壓間斷性缺氧條件(10％氧濃度，每天持續(xù)低氧10小時(shí))下飼養(yǎng)28天后，檢測(cè)動(dòng)脈血?dú)?、紅細(xì)胞壓積、肺動(dòng)脈壓力、右心室肥大指數(shù)等指標(biāo)，常規(guī)HE染色觀察低氧條件下肺血管重建的病理變化，計(jì)算機(jī)圖像分析儀測(cè)量肺動(dòng)脈管壁厚度占外徑的百分比(MT％)。籍此，研究慢性缺氧對(duì)大鼠心臟和肺動(dòng)脈的影響。 在第二部分研究中，建立大鼠離體心臟灌注左心做功模型，將常氧和缺氧大鼠分四組：Ⅰ組：常氧KH組，常氧大鼠心臟缺血9

4、0分鐘，給予KH液再灌注60分鐘。Ⅱ組：常氧ARG組，常氧大鼠心臟缺血90分鐘，給予KH+L-arg液再灌注60分鐘。Ⅲ組：缺氧KH組，慢性缺氧大鼠心臟缺血90分鐘，給予KH液再灌注60分鐘。Ⅳ組：缺氧ARG組，慢性缺氧大鼠心臟缺血90分鐘，給予KH+L—arg液再灌注60分鐘。記錄大鼠離體心臟缺血再灌注過(guò)程中心功能的變化，檢測(cè)缺血前和再灌注后冠脈流出液中心肌酶學(xué)和NO含量，檢測(cè)缺血前、缺血后和再灌注后左室組織中NOS、iNOS活性、N

5、T的表達(dá)水平和MDA含量。 結(jié)果 第一部分： 與常氧組相比，缺氧組大鼠動(dòng)脈血氧分壓顯著下降（P＜0.01)，血紅細(xì)胞壓積(HCT)、平均肺動(dòng)脈壓力(mPAP)、右室肥大指數(shù)(RVHI)較常氧組大鼠顯著增高（P＜0.01)。肺組織常規(guī)HE染色光鏡下觀察，中、小動(dòng)脈出現(xiàn)不同程度的低氧性肺動(dòng)脈重建，缺氧組大鼠中、小肺動(dòng)脈壁厚度占外徑的百分比(MT％)較常氧組顯著增高（P＜0.01)。 第二部分： 1.Ⅲ

6、組缺血前±dp/dtmax、CO明顯低于Ⅰ組(P＜0.05)，再灌注后±dp/dtmax較Ⅰ組顯著降低(P＜0.01)。Ⅳ組缺血前-dp/dtmax明顯低于Ⅱ組(P＜0.05)，再灌注后-dp/dtmax、CO較Ⅱ組顯著降低(P＜0.01)。Ⅱ組和Ⅳ組再灌注后的LVPSP、±dp/dtmax、CO和CF均分別明顯高于Ⅰ組和Ⅲ組，而LVEDP明顯低于Ⅰ組和Ⅲ組(P＜0.01)。 2.缺血前，各組間冠脈流出液中檢測(cè)的LDH、CK、C

7、KMB無(wú)明顯差別(P＞0.05)。再灌注后，Ⅲ組的LDH明顯高于Ⅰ組(P＜0.05)，Ⅳ組的LDH、CK、CKMB明顯高于Ⅱ組(P0.05)，Ⅱ組和Ⅳ組的LDH、CK、CKMB分別較Ⅰ組和Ⅲ組顯著降低(P＜0.01)。 3.缺血后各組左室組織中的NOS活性較缺血前顯著降低(P＜0.01)，再灌注后各組的NOS活性較缺血后顯著增高(P＜0.01)，各組間的NOS活性分別在缺血前、缺血后和再灌注后比較均無(wú)明顯差別(P＞0.05)。

8、 4.缺血后各組左室組織中iNOS活性較缺血前顯著增高(P＜0.01)，再灌注后各組iNOS活性顯著高于缺血后(P＜0.01)。缺血后Ⅲ組和Ⅳ組的iNOS活性分別較Ⅰ組和Ⅱ組明顯增高(P＜0.05)，缺血前和再灌注后各組間iNOS活性無(wú)明顯差別(P＞0.05)。 5.缺血前，各組冠脈流出液中的NO含量無(wú)明顯差別(P＞0.05)，再灌注后各組NO含量較缺血前顯著降低(P＜0.01)。Ⅲ組再灌注后的NO含量明顯低于Ⅰ組(P＜0

9、.05)，Ⅱ組和Ⅳ組的NO含量分別顯著高于Ⅰ組和Ⅲ組(P＜0.01)。 6.各組缺血前左室心肌中NT的免疫組化染色呈陰性，缺血后呈弱陽(yáng)性表達(dá)，再灌注后NT免疫組化陽(yáng)性染色信號(hào)較缺血后明顯增強(qiáng)，再灌注后Ⅱ組和Ⅳ組NT免疫組化陽(yáng)性染色分別弱于Ⅰ組和Ⅲ組。 7.各組左室組織中MDA的含量在缺血前和缺血后無(wú)明顯差別(P＞0.05)。再灌注后，Ⅱ組和Ⅳ組的MDA含量分別較Ⅰ組和Ⅲ組顯著降低(P＜0.01)。 結(jié)論