慢性缺氧心肌缺血再灌注時NO通路的變化及其意義的研究.pdf

1、研究背景和目的 長期慢性缺氧會導(dǎo)致右心室重構(gòu)、低氧性肺血管重建和低氧性肺動脈高壓等病理改變，對紫紺型先天性心臟病人心肌缺血再灌注損傷的病理變化及其機制進(jìn)行研究具有重要意義。近年的研究證明，內(nèi)皮型一氧化氮合酶/誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(eNOS/iNOS)在心肌缺血再灌注過程中的表達(dá)紊亂所致一氧化氮(NO)代謝異常在心肌損傷中扮演重要角色。目前有關(guān)NO通路在慢性缺氧心肌缺血再灌注中的變化及作用的研究尚未見報道。本實驗通過建立大鼠慢性缺氧

2、模型和離體心臟灌注左心做功模型，檢測慢性缺氧大鼠心臟缺血再灌注過程中心功能、心肌酶學(xué)指標(biāo)以及NO通路中的幾個重要物質(zhì)(包括NOS、iNOS、NO、NT和MDA等)，研究慢性缺氧心肌缺血再灌注時NO通路的變化和意義。并通過再灌注早期給予左旋精氨酸(L—arginine，NO生物合成前體)的干預(yù)，探討L-arg對慢性缺氧心肌缺血再灌注損傷的作用。 方法 本研究分為兩部分。 在第一部分研究中，建立大鼠慢性缺氧模型。成年

3、Sprague-Dawley大鼠在常壓間斷性缺氧條件(10％氧濃度，每天持續(xù)低氧10小時)下飼養(yǎng)28天后，檢測動脈血氣、紅細(xì)胞壓積、肺動脈壓力、右心室肥大指數(shù)等指標(biāo)，常規(guī)HE染色觀察低氧條件下肺血管重建的病理變化，計算機圖像分析儀測量肺動脈管壁厚度占外徑的百分比(MT％)。籍此，研究慢性缺氧對大鼠心臟和肺動脈的影響。 在第二部分研究中，建立大鼠離體心臟灌注左心做功模型，將常氧和缺氧大鼠分四組：Ⅰ組：常氧KH組，常氧大鼠心臟缺血9

4、0分鐘，給予KH液再灌注60分鐘。Ⅱ組：常氧ARG組，常氧大鼠心臟缺血90分鐘，給予KH+L-arg液再灌注60分鐘。Ⅲ組：缺氧KH組，慢性缺氧大鼠心臟缺血90分鐘，給予KH液再灌注60分鐘。Ⅳ組：缺氧ARG組，慢性缺氧大鼠心臟缺血90分鐘，給予KH+L—arg液再灌注60分鐘。記錄大鼠離體心臟缺血再灌注過程中心功能的變化，檢測缺血前和再灌注后冠脈流出液中心肌酶學(xué)和NO含量，檢測缺血前、缺血后和再灌注后左室組織中NOS、iNOS活性、N

5、T的表達(dá)水平和MDA含量。 結(jié)果 第一部分： 與常氧組相比，缺氧組大鼠動脈血氧分壓顯著下降（P＜0.01)，血紅細(xì)胞壓積(HCT)、平均肺動脈壓力(mPAP)、右室肥大指數(shù)(RVHI)較常氧組大鼠顯著增高（P＜0.01)。肺組織常規(guī)HE染色光鏡下觀察，中、小動脈出現(xiàn)不同程度的低氧性肺動脈重建，缺氧組大鼠中、小肺動脈壁厚度占外徑的百分比(MT％)較常氧組顯著增高（P＜0.01)。 第二部分： 1.Ⅲ

6、組缺血前±dp/dtmax、CO明顯低于Ⅰ組(P＜0.05)，再灌注后±dp/dtmax較Ⅰ組顯著降低(P＜0.01)。Ⅳ組缺血前-dp/dtmax明顯低于Ⅱ組(P＜0.05)，再灌注后-dp/dtmax、CO較Ⅱ組顯著降低(P＜0.01)。Ⅱ組和Ⅳ組再灌注后的LVPSP、±dp/dtmax、CO和CF均分別明顯高于Ⅰ組和Ⅲ組，而LVEDP明顯低于Ⅰ組和Ⅲ組(P＜0.01)。 2.缺血前，各組間冠脈流出液中檢測的LDH、CK、C

7、KMB無明顯差別(P＞0.05)。再灌注后，Ⅲ組的LDH明顯高于Ⅰ組(P＜0.05)，Ⅳ組的LDH、CK、CKMB明顯高于Ⅱ組(P0.05)，Ⅱ組和Ⅳ組的LDH、CK、CKMB分別較Ⅰ組和Ⅲ組顯著降低(P＜0.01)。 3.缺血后各組左室組織中的NOS活性較缺血前顯著降低(P＜0.01)，再灌注后各組的NOS活性較缺血后顯著增高(P＜0.01)，各組間的NOS活性分別在缺血前、缺血后和再灌注后比較均無明顯差別(P＞0.05)。

8、 4.缺血后各組左室組織中iNOS活性較缺血前顯著增高(P＜0.01)，再灌注后各組iNOS活性顯著高于缺血后(P＜0.01)。缺血后Ⅲ組和Ⅳ組的iNOS活性分別較Ⅰ組和Ⅱ組明顯增高(P＜0.05)，缺血前和再灌注后各組間iNOS活性無明顯差別(P＞0.05)。 5.缺血前，各組冠脈流出液中的NO含量無明顯差別(P＞0.05)，再灌注后各組NO含量較缺血前顯著降低(P＜0.01)。Ⅲ組再灌注后的NO含量明顯低于Ⅰ組(P＜0

9、.05)，Ⅱ組和Ⅳ組的NO含量分別顯著高于Ⅰ組和Ⅲ組(P＜0.01)。 6.各組缺血前左室心肌中NT的免疫組化染色呈陰性，缺血后呈弱陽性表達(dá)，再灌注后NT免疫組化陽性染色信號較缺血后明顯增強，再灌注后Ⅱ組和Ⅳ組NT免疫組化陽性染色分別弱于Ⅰ組和Ⅲ組。 7.各組左室組織中MDA的含量在缺血前和缺血后無明顯差別(P＞0.05)。再灌注后，Ⅱ組和Ⅳ組的MDA含量分別較Ⅰ組和Ⅲ組顯著降低(P＜0.01)。 結(jié)論